[发明专利]从蛇葡萄属植物中同时分离二氢杨梅素和杨梅素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及葡萄科蛇葡萄属植物化学成分提取分离技术领域，可用于蛇葡萄属植物茎叶及其加工品藤茶中杨梅素和二氢杨梅素的同时分离。

背景技术

葡萄科蛇葡萄属的植物中均含有黄酮成分杨梅素和二氢杨梅素，其中以显齿蛇葡萄（Ampelopsis-grossedentada）含量最高，显齿蛇葡萄茎叶的加工品俗称藤茶，藤茶有多种生理活性，主要有效成分为黄酮类化合物，并以二氢杨梅素含量为最高，主要活性成分黄酮含量可高达40%以上。此外，还含有杨梅素、儿茶素、没食子酸、氨基酸、微量元素等多种成分；藤茶黄酮的主要成分二氢杨梅素和杨梅素，美国FDA已将杨梅素广泛应用于医药、食品、保健品和化妆品；而二氢杨梅素具有清除自由基、抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、消炎等多种功效，广泛应用于治疗呼吸道感染、酒精中毒的中成药制剂并已在制备抗白血病及鼻咽癌药物的应用领域取得了发明专利；是保肝护肝，解酒醒酒的良品，可作为医药原料药。但是由于二氢杨梅素和杨梅素均属多羟基黄酮醇类化合物，结构和理化性质相近，且杨梅素和二氢杨梅素在贵州藤茶中的含量差异较大，杨梅素含量在1~3%，二氢杨梅素含量可达18~25%，所以藤茶中杨梅素和二氢杨梅素成分的高效分离一直是阻碍其应用于工业产业化的技术难题。据目前的文献及专利报道，采用经典的提取分离方法如乙醇回流法，煎煮法等多是单一的对含量较高的二氢杨梅素进行分离纯化 ，如中国专利-一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法（专利号200510032918.5）提出了对藤茶干叶溶剂浸泡，湿藤茶叶微波辐射处理，水浴加热提取，然后用冷水重结晶分离纯化二氢杨梅素的方法。该法操作简单，杂质少，成本低，但是不能同时分离杨梅素。目前涉及二氢杨梅素或杨梅素的高效的分离纯化方法则配合了各种近代分离技术，主要是各种色谱技术。发表的文献主要有：中国民族医药杂志的“瑶族藤茶中杨梅素的分离和结构鉴定”；《现代化工》的“利用高速逆流色谱法同时纯化藤茶中的二氢杨梅素和杨梅素” ；《天然产物开发》的 “增温溶解，保温过柱，温水解吸”提制二氢杨梅素(一) ”；《哈尔滨医科大学学报》的“藤茶中杨梅素和二氢杨梅素的分离及抗心肌细胞凋亡作用”。此类技术主要是采用水提或醇提法，加以微波或超声辅助提取技术得到高含量的总黄酮，然后配合各种色谱技术如硅胶柱色谱，聚酰胺柱色谱，大孔树脂吸附色谱，高速逆流色谱等，根据目的需要采用适当的流动相系统和适宜的操作条件分离得到杨梅素或二氢杨梅素。此类方法分离效率高，纯度高，但是此法在生产上投资大，制备规模小，且操作要求高，不利于工业化生产。国内也有对采用溶剂提取法同时分离杨梅素和二氢杨梅素的报道。《中国现代应用药学》的“广西藤茶中黄酮类成分的提取工艺研究”提出，利用杨梅素和二氢杨梅素在丙酮中的溶解性差异，可将提取得到的黄酮粗品用丙酮回流提取，提取液浓缩后用水重结晶得到二氢杨梅素，不溶性残渣再用乙醇-水混合溶剂提取，浓缩，静置数日后可得杨梅素结晶。此法虽简便易操作，但提取得到的杨梅素含杂质较多，且获得率低。参阅国内外文献，迄今尚未见到一种能用简单溶剂法高效同时分离杨梅素和二氢杨梅素，并可有望运用于工业化生产的分离方法。

发明内容

本发明是为了解决杨梅素和二氢杨梅素分离难，而难于运用于工业化的问题，特提出一种从蛇葡萄属植物中同时分离二氢杨梅素和杨梅素的方法。

 本发明的目的是通过下述技术方案实现的。1、从蛇葡萄属植物中同时分离二氢杨梅素和杨梅素的方法，包括（1）从蛇葡萄属植物粗碎样品中水提醇溶精制总黄酮的步骤，（2）用丙酮回流提取总黄酮初分离二氢杨梅素的步骤，（3）用乙醇-水提取不溶性残渣分离杨梅素的步骤，（4）采用水重结晶纯化二氢杨梅素和杨梅素的步骤。其特征在于在采用水重结晶纯化二氢杨梅素时，通过加热过滤操作将初分离得到的二氢杨梅素中的杨梅素和二氢杨梅素分离。

2.根据权利要求1所述的同时分离杨梅素和二氢杨梅素的方法，其特征在于所述的乙醇-水提取不溶性残渣分离杨梅素的步骤（3），乙醇-水的比例为1:1。

3.根据权利要求1所述的同时分离杨梅素和二氢杨梅素的方法，其特征在于所述的重结晶纯化二氢杨梅素和杨梅素的步骤（4），加热过滤操作温度应为85-95℃，并且直至过滤溶液加热为黄绿色为止。

4.如权利要求1所述的同时分离杨梅素和二氢杨梅素的方法，其特征在于所述的重结晶纯化二氢杨梅素的步骤（4），二氢杨梅素的重结晶次数应≥3次。

本发明对比以往分离方法具有以下创新点：

1.  首次通过重结晶加热过滤操作获得杨梅素；

2.  可由两个途径获得杨梅素；