[发明专利]氯胺酮胶体金检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及胶体金免疫层析领域，具体涉及一种氯胺酮胶体金检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

氯胺酮(Ketamine，KET)是苯环己哌啶(N-1-phenycyclohexy-piperidine，PCP)的衍生物，医学上作为外科手术麻醉剂，黑市上俗称“K粉”、“K仔”。近年来在娱乐场所滥用日趋严重，严重威胁健康。氯胺酮通常的使用方式以香烟吸服、鼻吸、静脉注射或将粉末溶入饮料中进行饮用。研究表明，在服用氯胺酮后都会出现“去人格化”、“去真实感”、人体形象改变、梦境、幻觉以及恶心呕吐，大剂量服用，会出现意识模糊、身体呈木僵状，呼吸抑制，甚至出现四肢抽搐以及呼吸停止等现象；长期使用氯胺酮可造成记忆缺失、认知功能损害和精神病。人体服用的氯胺酮有70％-90％在肝内代谢并经尿液排出，其在体内的代谢较快，清除半衰期约为2.5小时，一般在吸食后2-4小时内即可被检出。

鉴于氯胺酮的严重危害性，国家对氯胺酮管理日趋严格，本领域对氯胺酮和滥用毒品者生物标本中的氯胺酮检测提出了更高的要求。

胶体金免疫层析技术是近年来发展起来的一种独特的免疫诊断技术，由于其具有特异性强、灵敏度高、简单快速、易于操作、结果容易判读，无需附加仪器设备等优点而被广泛应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种氯胺酮胶体金检测试剂盒及其制备方法，从而有效提高试剂盒的检测灵敏度及质量。

本发明一方面公开了一种氯胺酮胶体金检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗氯胺酮单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有氯胺酮-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被有羊抗鼠IgG的质控线。

较优的，所述胶体金的颗粒大小为39～42nm。

较优的，所述胶体金是由两步还原法制备获得。

更优的，所述两步还原法的步骤为：

a)第一次还原氯金酸溶液：制备浓度为0.0004-0.0005mol/L的HAuCl₄水溶液，加热煮沸20-30分钟，之后边搅拌边加入柠檬酸三钠水溶液，HAuCl₄与柠檬酸三钠的摩尔比为1∶8～9，超声振荡2-3分钟后冷却至室温，即制得14～16nm粒径的胶体金原溶液；

b)第二次还原氯金酸溶液：将第一步制得的胶体金原溶液放置4.0℃水浴中保持温度恒定，随后按胶体金原溶液与HAuCl₄水溶液体积比1∶1.9～2.0加入4.0℃的0.003-0.004mol/LHAuCl₄水溶液，随后立即边搅拌边滴加4.0℃的抗坏血酸与PVP的混合水溶液，加入的抗坏血酸与本步骤加入的HAuCl₄的摩尔比为25～26∶1，加入的PVP与本步骤加入的HAuCl₄的重量比为1∶2.0～2.1，反应中保持温度恒定，搅拌至反应完全，溶液呈透明的酒红色，制得39-42nm粒径的胶体金溶液；

两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸水。

最优的，步骤a)中，加入柠檬酸三钠水溶液的浓度为0.01-0.02mol/L。

最优的，步骤a)中，超声震荡的频率为20-30KHZ。

最优的，步骤b)中，抗坏血酸与PVP的混合水溶液的滴加速度为1-2滴/s。

最优的，步骤b)中，所述抗坏血酸与PVP的混合水溶液中，抗坏血酸的浓度为0.017-0.019mol/L，PVP的浓度为0.137-0.139g/L。

步骤b)中，搅拌反应约为50-70分钟。

采用上述方法制得的胶体金清亮透明，粒径尺寸均一，无凝集颗粒，基本未发现非球形粒子。

较优的，所述免疫胶体金纸片是经过预处理的玻璃纤维纸，所述预处理的预处理液包括0.5～0.8v％Tween-20，12～18w/v％蔗糖，溶剂为水。

更优的，所述免疫胶体金纸片是经过预处理的玻璃纤维纸，所述预处理的预处理液配方为：0.7v％Tween-20，16w/v％蔗糖。

本发明的另一方面，提供了一种氯胺酮胶体金检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1)两步还原法制备胶体金；

2)用步骤1)制备的胶体金标记抗氯胺酮单克隆抗体，获得胶体金标记的抗氯胺酮单克隆抗体(免疫胶体金)；