[发明专利]检测肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，具体而言，本发明涉及一种应用胶乳粒子增强技术提高肌红蛋白浓度检测的灵敏度的试剂盒。

背景技术

肌红蛋白是肌肉中运载氧的蛋白质，由153个氨基酸残基组成，可帮助肌细胞将氧转运到线粒体。肌红蛋白在正常人血清中含量甚微，当心肌或骨骼肌受损时，会从受损肌细胞中释放入血。在急性心肌梗塞时发生心肌缺血坏死，细胞通透性增加，由于肌红蛋白的分子量仅为17,500，远小于CKMB和AST等酶分子，因此更易释放进入血循环，12h内几乎所有心肌梗塞患者肌红蛋白都有升高，幅度大于各种心肌酶，从而成为急性心肌梗塞最早的诊断学指标。

另一方面，由于肌红蛋白半衰期短(15min)，胸痛发作后6-12h不升高，有助于排除心肌梗塞的诊断，是筛查心肌梗塞重要而有效的指标。肌红蛋白还是溶栓治疗中判断有无再灌注的敏感而准确的指标。若溶栓术后1-2小时内肌红蛋白的浓度超出溶栓术前的4倍，则提示成功再灌注。由于在心肌梗塞后患者血中肌红蛋白很快从肾脏清除，发病18-30h内可完全恢复到正常水平，故肌红蛋白的测定有助于在心肌梗塞病程中观察有无再梗死或梗死再扩展。肌红蛋白频繁增高，提示原有心肌梗死仍在延续。因此，高灵敏度的肌红蛋白的检测在诊断心肌损伤疾病方面的及时性、进程、预后及治疗效果方面具有广泛的临床意义。

目前临床常用检测肌红蛋白的方法有ELISA法、胶体金法和化学发光法等。其中ELISA法适合大批量检测，但重复性差，操作复杂；胶体金法特异性相对较好，但敏感度偏低；化学发光法灵敏度高，特异性好，但成本要求过高。另外免疫化学法也比较灵敏，但抗血清必须是对肌红蛋白特异的。对流免疫电泳是一种定性方法，灵敏度只有2mg/ml(血清中肌红蛋白参考范围：0-70ng/ml)，不适宜检测心肌梗死。放射免疫试验灵敏度高，特异性强，但使用放射性同位素，造成对环境的污染，现已少用。

现有的乳胶免疫比浊试剂盒灵敏度低，线性差、抗体利用率也较低，导致价格昂贵。因此有必要采取新的技术方案来克服现有产品抗体利用率低、线性差和灵敏度低的缺点。

发明内容

因此，本发明的技术目的在于研制一种抗体利用率高、线性好、灵敏度高的肌红蛋白胶乳增强免疫比浊试剂盒。

因此，本发明的第一方面涉及一种检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和肌红蛋白标准品，其中试剂R1为反应缓冲液，试剂R2为苯乙烯胶乳颗粒、肌红蛋白抗体和反应缓冲液形成的白色胶乳悬浊液，肌红蛋白标准品为含有不同浓度肌红蛋白的反应缓冲液，其特征在于所述的肌红蛋白抗体先利用高碘酸盐氧化然后利用碳化二亚胺和双官能团交联剂定向固定在苯乙烯胶乳颗粒上。

优选地，所述的反应缓冲液为PBS缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液或氯化铵缓冲液中的一种或几种，缓冲液浓度在20-500mM之间，优选地，反应缓冲液为PBS缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或两种组合，浓度为20-200mM。

优选地，所述的苯乙烯胶乳颗粒粒径范围为0.05-0.5μm，优选地，苯乙烯胶乳颗粒粒径为0.08-03μM，羧基含量为100-300μmol/g，优选地，含量为120-200μmol/g。

优选地，所述的肌红蛋白抗体为非亲和的IgG抗体、亲和的IgG抗体或IgY抗体中的一种或两种，抗体来源为兔抗人、山羊抗人、绵羊抗人、鼠抗人、鸡抗人、鸭抗人抗体中的一种或两种，抗体种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。