[发明专利]油桐成熟叶片和老叶片基因组DNA提取方法

权利要求书

1.一种油桐成熟叶片和老叶片基因组DNA提取方法，其特征在于包括下列步骤：

①将叶片组织样品在液氮速冻下磨成细粉后，取0.3g转入2mL离心管中，加入1.5mL洗液，充分混匀后，冰中静止15min，12000rpm离心弃上清液；

②弃掉洗液后，加入500μl预热的3％CTAB提取液，充分混匀，65℃水浴40min；

③12000rpm常温离心15min，转移上清液到新的1.5mL离心管中，加入100μl的24∶1的氯仿-异戊醇，充分混匀后，常温12000rpm离心15min，抽提1～2次，抽提后的上清液转入新的离心管中，加入两倍体积的提前预冷到-20℃的100％酒精；放置于-20℃冰柜30min，让DNA沉淀充分析出，将析出的DNA沉淀转移到含有1mL 70％酒精的1.5mL离心管中，漂洗1～2次，每次30min，倒干酒精，待DNA沉淀干燥后，用100μl的T_0.1E充分溶解，并用1μl浓度为10μg/mLRNA酶37℃消化30min，该过程得到的DNA样品，称为1^stDNA；

④对步骤③中转移上清液后离心管底部的组织样品，继续加入500μl的3％CTAB提取液进行提取，该组织样共循环提取4次，依此又得到3批次DNA样品，分别称为2^ndDNA、3^rdDNA和4^thDNA。

2.按权利要求1所述的一种油桐成熟叶片和老叶片基因组DNA提取方法，其特征在于：

所述的洗液的成分为：50mM Tris-HCl，5mM EDTA，350mM山梨醇，2％PVP，0.5％β-巯基乙醇PH值为8.0。

3.按权利要求1所述的一种油桐成熟叶片和老叶片基因组DNA提取方法，其特征在于：

所述的3％CTAB提取液成分为：3％CTAB，100mM Tris-HCl，20mM EDTA，1.4MNaCl，2％PVP，0.5％β-巯基乙醇，pH值为8.0。

4.按权利要求1所述的一种油桐成熟叶片和老叶片基因组DNA提取方法，其特征在于：

所述的T_0.1E成分为：10mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，pH 8.0。