[发明专利]一种检测EB病毒抗体的试剂装置及其方法

说明书

技术领域

本发明申请涉及一种检测EB病毒抗体的试剂装置及其方法，属于临床免疫学检测技术领域。

背景技术

EB病毒(epstein-barr virus，EBV)，又称人类疱疹病毒(Human herpesvirus4，HHV-4)，其形态与其他疱疹病毒相似，为圆形，直径180nm，基本结构含核样物、衣壳和囊膜三部分。囊膜由感染细胞的核膜组成，其上有病毒编码的膜糖蛋白，有识别淋巴细胞的EB病毒受体及与细胞融合等功能，此外在囊膜与衣壳之间还有一层蛋白被膜。

EB病毒是一种嗜B细胞的人类疱疹病毒，主要侵犯B细胞，对人的B淋巴细胞、咽上皮细胞和腺细胞有亲和力。过去认为只有B细胞表面有EBV受体，但最近发现在腮腺管、咽以及宫颈外的某些上皮细胞亦有EBV受体，因此EBV亦可以感染上皮细胞。一旦感染，EBV将长期潜伏在人体B细胞中，受感染者将成为终生带毒者。在一定的条件或某些诱导因子的作用下，潜伏感染细胞中的EBV基因组被激活而表达，转化为增殖性感染。由EBV感染引起或与EBV感染有关疾病主要有传染性单核细胞增多症、非洲儿童淋巴瘤(即Burkitt淋巴瘤)、鼻咽癌。

被病毒感染的细胞具有EBV的基因组，可产生各种抗原，主要有：EBV核抗原(EBNA)、早期抗原(EA)、膜抗原(MA)、衣壳抗原(VCA)和淋巴细胞识别膜抗原(lydma)，人体感染EBV后能诱生抗EBNA抗体，抗EA抗体，抗VCA抗体及抗MA抗体。

EB病毒衣壳抗原IgG和IgM抗体阳性通常是传染性单核细胞增多症的血清学诊断指标。EB病毒感染的恢复期时，衣壳抗原IgG抗体阳性，可终生存在；EB病毒既往感染时，EBV VCA IgG轻度升高；有慢性活动性EB病毒感染时，出现高滴度的EBV VCA IgG。EB病毒感染处于急性期时，EB病毒抗衣壳抗原抗体IgM阳性；近期感染或病毒持续活动状态时，EBV VCA IgM升高，故早期EBV VCA IgM检查是EB病毒感染的可靠的指标之一。

抗EB病毒核心抗原抗体一般于发病1个月后开始出现，逐渐升高，终生持续存在。在染上单核白血球增多症的过程中，病毒衣壳抗原抗体最早产生，核心抗原抗体之后产生，主要是IgG类抗体，而IgA类抗体主要应用于鼻咽癌的血清学诊断。

EB病毒早期抗原IgG、IgM、IgA抗体主要应用于鼻咽癌的血清学诊断。

临床上通常可以根据需要同时检测两种或两种以上的抗体，作为鼻咽癌早期发现、预后判断以及疗效观察的有用指标。

临床检测EB病毒抗体的常见方法包括金标法、间接免疫荧光法、滴金免疫测定法、酶联免疫吸附试验的方法，但这些方法都存在着不足之处。

一、金标法

金标法是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，胶体金已经广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

该方法快速、敏感性高，但其特异性差，假阳性率较高，且只能做定性检测，不能定量。

二、间接免疫荧光法

该法的基本原理是用特异性的抗体与载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗体。该方法由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

(1)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别；

(2)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室；

(3)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难；

(4)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足；

(5)只能进行定性检测，不能进行定量检测。

三、滴金免疫测定法(滴金法)

滴金免疫测定法是在80年代后期发展起来的一种简便快速的斑点免疫结合试验，其基本原理是以微孔滤膜为载体，以胶体金为免疫标记物，通过膜的渗滤作用，使抗原抗体反应在膜上迅速完成，最终阳性结果在膜上出现红色斑点。滴金法的特点是操作简便、快速，可在短时间内完成测定，且为单份测定，也不需任何仪器设备。

但该方法成本价格昂贵，特异性差，假阳性率较高，且只能做定性检测，不能定量。

四、酶联免疫吸附法