[发明专利]猪肺炎支原体DJ-166株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于兽医微生物技术领域，特别涉及猪肺炎支原体DJ-166株及其应用。

背景技术

猪支原体肺炎又称猪喘气病，是由猪肺炎支原体引起的一种猪的接触性慢性呼吸道疾病，呈世界普遍流行。据资料报道，世界各地分离的猪肺炎支原体均属于同一血清型，但分离株之间抗原性有很大差异。1992年Frey首次证实了猪肺炎支原体分离株之间抗原性的差异；1996年，Artiushin和Minion进一步证实了Frey的观点；1999年，Kokotovic也同样证实了这一结论。因此，分离出一株抗原性较好的猪肺炎支原体菌株进行疫苗和诊断试剂盒应用，对防治猪支原体肺炎至关重要，特别是分离出一株适合制备灭活疫苗的菌株，将填补国内无自主研发猪喘气病灭活疫苗的空白。

发明内容

本发明的目的在于提供一株新的抗原性好的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)。

本发明的另一目的在于提供该株猪肺炎支原体在制备用于猪肺炎支原体感染引发疾病的预防用兽用生物制品或兽药中的应用。

本发明还提供了该株猪肺炎支原体在制备疫苗或免疫诊断用试剂盒中的应用。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明提供一株猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)DJ-166株，其微生物保藏号为CGMCC No.4545。

本发明的猪肺炎支原体DJ-166株可用于制备猪肺炎支原体感染引发疾病的预防用兽用生物制品或兽药。

进一步，本发明的猪肺炎支原体DJ-166株可用于制备疫苗。

所述的疫苗包括：灭活疫苗、基因工程疫苗。

本发明的猪肺炎支原体DJ-166株也可用于制备免疫诊断用试剂盒。

所述的免疫诊断用试剂盒包括抗体检测试剂盒、抗原检测试剂盒。

有益效果

本发明的猪肺炎支原体DJ-166株CGMCC No.4545为申请人自行分离得到，在制备的无细胞培养基中培养，活菌滴度可达10¹⁰～10¹¹CCU/ml，降低生产成本；其免疫原性好，平均肺炎病变减少率可达80％以上。

本发明的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)DJ-166株为申请人从山西养猪场35日龄二元杂交病猪肺脏组织分离得到，以江苏省地方标准(DB32/T 1461-2009)猪肺炎支原体检测PCR法，设计引物扩增出特异性猪肺炎支原体P36基因片段，经过基因测序后，初步确定为猪肺炎支原体。然后又经多重PCR(猪鼻支原体、猪絮状支原体和猪肺炎支原体)、培养特性、生化特性和血清学特性鉴定，证明为猪肺炎支原体，纯净。菌株在人工合成培养基传8代稳定后，经过3次克隆纯化后制备得到该株猪肺炎支原体。本发明的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)DJ-166株申请人已于2011年01月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，简称CGMCC，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No.4545。

附图说明

图1猪肺炎支原体DJ-166株PCR鉴定

其中，M：DNA标准DL 2000；1：DJ-166株扩增产物；2：阳性对照；3：阴性对照

图2猪肺炎支原体DJ-166株多重PCR鉴定

其中，M：DNA标准DL 2000；1：阴性对照；2：猪肺炎支原体阳性对照；3：组织样品(DJ-166株)；4：猪鼻支原体阳性对照；5：猪絮状支原体阳性对照；6：猪鼻支原体、猪絮状支原体和猪肺炎支原体阳性对照

图3猪肺炎支原体DJ-166株菌落间接表面荧光试验结果

具体实施方式

通过下列实施例将更具体说明本发明，但是应理解所述实施例仅是为了说明本发明，而不是以任何方式限制本发明的范围。

实施例1本发明猪肺炎支原体DJ-166株分离鉴定

1培养基及其配制

液体培养基：

A液：脑心浸出液2.0g、PPLO肉汤5.0g、去离子水300ml

以上各成分混合，搅拌，使之完全溶解，116℃高压灭菌20分钟，冷却后备用；