[发明专利]鸡传染性喉气管炎、鸡痘二联活疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种鸡传染性喉气管炎、鸡痘二联活疫苗，特别是指一种鸡传染性喉气管炎、鸡痘二联冻干活疫苗，属于兽用疫苗领域。

背景技术

鸡传染性喉气管炎是由传染性喉气管炎病毒引起的一种急性、接触性上部呼吸道传染病。其特征是呼吸困难、咳嗽和咳出含有血样的渗出物。剖检时可见喉部、气管粘膜肿胀、出血和糜烂。在病的早期患部细胞可形成核内包涵体。本病1925年在美国首次报道后，现已遍及世界许多养鸡地区。本病传播快，死亡率较高，在我国较多地区发生和流行，危害养鸡业的发展。

鸡痘是由鸡痘病毒引起的传染病，多年来在全国各地都有发生。尤其在秋季，根据症状和病变的表现，鸡痘可分为皮肤型、白喉型和混合型。一般以皮肤型者居多，它在冠、肉垂、嘴角、眼皮、耳球和腿、脚、泄殖腔以及翅的内侧等部位形成一种特殊的痘疹。病鸡往往精神萎顿，鸡群采食量减少，明显消瘦，生长受阻，发育不良等。白喉型鸡痘主要在喉头及气管中产生多量黄色干酪样或脓样物，堵塞咽喉，造成病鸡呼吸困难，因气流不畅，喉部发出“咯......咯”的尖叫声，患鸡因停食衰竭和窒息而死亡。混合型鸡痘具备上述两型鸡痘特征，死亡率更高，严重者可高达30％-40％，给养鸡业带来巨大的经济损失。

通常情况下，鸡群发生温和性及皮肤型痘时，死亡率较低，而发生全身性感染，特别是发生白喉型，或者有并发感染传染性喉气管炎及环境条件差时，死亡率较高，给鸡场带来严重的损失。疫苗免疫是控制这两种病的根本措施，目前使用最多的是鸡痘病毒鹌鹑化株弱毒活疫苗，通过刺种的方法免疫；及鸡传染性喉气管炎弱毒鸡胚组织苗，采用滴鼻点眼方式接种来防治。因为接种方式不同，这两种病需要至少需要两次接种才能预防，多次接种不仅养殖成本上升，而且多次对鸡体产生刺激，影响免疫效果。另外，由于鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗点眼后往往引起免疫鸡结膜发炎、失明等严重副反应，给养鸡户带来一定损失。

发明内容

本发明通过鸡全胚成纤维细胞培养鸡传染性喉气管炎病毒及鸡痘病毒，特别是成功使用鸡全胚成纤维细胞培养鸡传染性喉气管炎病毒，获得鸡全胚成纤维细胞培养的鸡传染性喉气管炎病毒及鸡痘病毒，进而通过对两种病毒液比例进行调整，使得两种病毒抗原相互无影响，加入适宜的冻干保护剂后，而获得了一种二联冻干活疫苗。该二联冻干活疫苗可以采用翅下皮下刺种的方式免疫接种，既可以减轻鸡传染性喉气管炎活疫苗的副反应，又能简化免疫操作，减少应激反应以及降低生产成本。同时，采用新的配方制备的冻干保护剂，能有效的延长活疫苗的存放时间，为产品的保藏及运输带来了极为便利的条件。

技术方案

即本发明的主要目的在于提供一种鸡传染性喉气管炎、鸡痘二联活疫苗，其含有鸡传染性喉气管炎病毒，与鸡痘病毒。

优选地，本发明所述的鸡传染性喉气管炎病毒，与所述的鸡痘病毒均使用鸡全胚成纤维细胞培养获得的。

优选地，本发明所述的鸡传染性喉气管炎病毒含量为10⁶/0.1mlEID₅₀，鸡痘病毒含量为10⁶/0.1ml EID₅₀。

优选地，本发明所述的二联活疫苗为使用鸡痘病毒与鸡传染性喉气管炎病毒两种病毒液按1∶1的体积比例混合，使二联活疫苗中每羽份鸡痘病毒含量为10⁴EID₅₀、鸡传染性喉气管炎病毒含量为10⁴EID₅₀。

本发明还提供了一种鸡传染性喉气管炎、鸡痘二联冻干活疫苗，即使用上述二联活疫苗，加入冻干保护剂，经冷冻干燥后获得。

优选地，本发明所述的冻干保护剂包括以下组分：A液：L-谷氨酸钠3％W/V，蔗糖7％W/V，D-山梨醇2％W/V，硫代硫酸钠2％W/V，维生素C 0.2％W/V，余量为水；B液：聚乙烯吡咯烷酮3％W/V，余量为水；A液和B液体积配比为1∶1。

本发明还提供了一种鸡传染性喉气管炎、鸡痘二联活疫苗制备方法，其中，使用鸡全胚成纤维细胞分别培养鸡传染性喉气管炎病毒与鸡痘病毒。

优选地，本发明二联活疫苗的制备方法包括以下步骤：

1)在形成细胞单层的鸡全胚成纤维细胞中，加入含1％胎牛血清的细胞维持液，pH调至6.8，接种鸡痘病毒，吸附并培养至CPE大于80％以上时停止培养，收获鸡痘病毒；