[发明专利]用于上皮组织肿瘤细胞的检测剂组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测剂组合物，特别涉及一种用于上皮组织肿瘤细胞的基于颜色变化的检测剂组合物。本发明还涉及制备所述检测剂组合物的方法，以及包含所述检测剂组合物的试剂盒。

背景技术

目前，用于对人体上皮组织肿瘤细胞进行活体染色的方法主要有基于乙酸白化反应的方法、碘实验、甲苯胺蓝实验、亚甲基蓝染色、苏木素染色等。

具体而言，乙酸白化反应是通过将乙酸溶液，例如3-5％的乙酸溶液，涂抹在宫颈/阴道上皮组织上，等待一段时间之后观察所涂抹的上皮组织有无乙酸白化反应区，如果有白化区，则该上皮组织怀疑有肿瘤细胞。然而，此方法虽然敏感性高，但是特异性差，因为除了肿瘤细胞之外，部分炎症细胞也可以产生乙酸白化反应，因而产生假阳性的结果。并且该方法的特异性受操作者的技术水平和经验影响较大。

碘实验的原理是糖原反应，是将卢戈氏碘液涂抹在宫颈上皮组织上，然后通过观察上皮细胞的碘染现象来进行的检测。其中，正常上皮呈赤棕色或黑色，而异常上皮呈厚的芥末黄或土黄色。但是，在上皮有炎症时，这些区域可能不会受到染碘，或是呈现无色的装填，所以碘实验对上皮细胞染色的特异性较低^[1]。

使用甲苯胺蓝的方法易使中性白细胞和细菌的核碎片着色，导致较多假阳性，对表面有角化的粘膜白斑和癌不易着色，易造成假阴性^[2]。

上皮组织苏木素染色后需要借助高倍显微镜进行观察，操作相对复杂，对操作者的专业技术和经验要求较高，且检查费时较长。

亚甲基蓝与癌细胞的亲和性使恶性组织易于染成蓝色，有研究将其用于食道上皮组织的定位活检取材，其具有提高活检阳性率的作用^[3]。但是，现有技术中还没有将亚甲基蓝的氧化还原变色反应与叶酸、叶酸复合物组合使用，通过染色和颜色变化反应快速定位和检测上皮肿瘤细胞的报道。

本领域急需一种准确率高、特异性强、操作简便快捷的对上皮组织肿瘤细胞通过染色和颜色变化进行检测的组合物，特别是用于宫颈/阴道上皮组织肿瘤细胞。

发明内容

本发明的发明人发现，利用叶酸和/或叶酸复合物与肿瘤细胞中过度表达的叶酸受体的相互作用，并结合亚甲基蓝在氧化还原作用中的颜色变化，能够迅速、准确地对异常的上皮组织进行特异性染色，进而将其与正常组织进行区分，并通过本发明组合物的颜色变化快速显示受试的组织细胞是否为肿瘤细胞，由此提供了迅速、简易、准确、灵敏的对异常上皮组织的定位和检测，由此完成了本发明。本发明的检测剂组合物敏感性高、特异性高，操作简便，检查时间短，且操作者不需技术培训。除此之外，亚甲基蓝作为一种在临床上广泛使用的试剂，具有有效、安全、低廉并且容易获得的优点，从而使得本发明的组合物和方法也具有这些优势。

因此，本发明提供了一种检测剂组合物，所述组合物包含以下组分(按重量百分比计)：

在上述检测剂组合物的优选实施方案中，叶酸的含量优选为0-4.5％，更优选为0-1％。

在另一个优选的实施方案中，叶酸复合物的优选含量为0-8％，更优选为0-1％。

在另一个优选的实施方案中，亚甲基蓝的含量优选为0.05-4.5％，更优选为0.05-0.5％。

在另一个优选的实施方案中，乙酸的含量优选为3-5％。

本发明的检测剂组合物中所用的糖类还原剂包括各种糖类及其衍生物，优选葡萄糖、果糖、半乳糖、己糖、乳糖、麦芽糖及其衍生物等。

本发明的另一个方面涉及制备本发明的检测剂的方法，所述方法依次包括以下步骤或由以下步骤组成：

(a)按上述重量百分比将叶酸和/或叶酸复合物溶于含水溶剂中形成溶液，

(b)按上述重量百分比将亚甲基蓝加入到溶液(a)中搅拌溶解，

(c)按上述重量百分比将糖类还原剂加入溶液(b)中，

(d)将步骤(c)中获得的溶液搅拌30分钟，

(e)按上述重量百分比将乙酸加入溶液(d)中搅拌混合，

上述各步骤都是在常温和常压下进行的。

在优选的方面，根据本发明的检测剂或根据本发明的方法制备的检测剂用于上皮组织肿瘤细胞。

本发明还涉及一种检测上皮组织病变的方法，所述方法包括：

(a)将本发明的活细胞检测剂借由载体施用于受试者的上皮组织表面；

(b)观察载体上的颜色变化；

(c)根据颜色变化决定所测试的上皮组织是否产生病变。