[发明专利]川丹参的组织培养快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组织培养方法，更具体的说涉及一种川丹参1号的组织培养快繁方法。 

技术背景

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属(Salvia)多年生草本植物，以其根及根茎入药，因其色红且形状似参而得名“丹参”，又称赤参、木羊乳(《吴普本草》)、紫丹参(《现代实用中药》)、红根(《中国药植志》)等。始载于《神农本草经》，列为上品，为历版《中华人民共和国药典》收载中药丹参的唯一来源。其性微寒、味苦、无毒，归心、肝二经，有活血通经、祛瘀止痛、清心安神之功效。用于治疗月经不调，经闭痛经，瘾瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛。 

四川省中江县是川产道地药材——“川丹参”的主产区，其丹参种植历史悠久，据中江现存最古老的县志《康熙志》记载(成书于公元1715年)，中江的药材生产当时已初具规模。中江丹参品质极佳，以其根结实、色朱味浓、产量大、品质优而驰名中外，在国内外享有良好的声誉，树立起了“中江丹参”的品牌。从现有混杂群体中经过多年的系统选育，2011年性状稳定一致、药材产量高、品质优良、适合中江地区栽培的优质丹参新品种川丹参1号CDS-1通过了四川省品种审定委员会审定。 

近年来丹参的产业化、规模化进程加快，对优质种苗的需求量迅速增加，川丹参的传统无性根条繁殖，其繁殖系数较低，种苗带病毒等问题日益严重，这已严重影响了丹参产业的快速发展，也限制了川丹参1号这一新品种的推广。 采用现代生物技术，对川丹参1号进行组织培养与快繁，期望纯化种性，提高产量，达到“稳定、安全、可控”，既可以满足市场需要、增加农民的现金收入，又有利于出口创汇，具有较好的应用和推广意义。 

发明内容

本发明的目的是针对现有川丹参1号育种长期采用根条繁殖、种苗带病毒等问题提供一种川丹参1号组织培养快繁方法，该方法可以大量快速繁殖出生长速度快、品质优和染菌率低的丹参组培苗。 

为达到上述目的，本发明采用的以嫩茎段为外植体的川丹参1号组织培养快繁方法，步骤如下： 

1.选择外植体：选取川丹参1号带顶芽和带节的嫩茎段2～4cm为外植体； 

2.消毒处理：将步骤1的嫩茎段经自来水冲洗、洗衣粉液清洗后，流水冲洗30min，超净工作台上用无菌水冲洗1～3次，75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗2～4次，再用0.1％HgCl₂并滴加3-5滴吐温-80消毒5-7min，然后用无菌水冲洗5次以上； 

3.诱导培养：从消毒后的材料上切取0.5～1.5cm带顶芽或带节的丹参嫩茎段接种到诱导培养基上培养小苗；所用培养基为MS+0.6mg/L6-BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为8.0g/L，蔗糖浓度为30.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0； 

4.增殖培养：将诱导培养基上产生的无根小苗，剪成1～3个节的切断转接到继代增殖培养基中培养，所用增殖培养基为2/3MS+0.4mg/L6-BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为6.0g/L，蔗糖浓度为27.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0； 

采用现代生物技术，对川丹参1号进行组织培养与快繁，期望纯化种性，提高产量，达到“稳定、安全、可控”，既可以满足市场需要、增加农民的现金收入，又有利于出口创汇，具有较好的应用和推广意义。 

发明内容

本发明的目的是针对现有川丹参1号育种长期采用根条繁殖、种苗带病毒等问题提供一种川丹参1号的组织培养快繁方法，该方法可以大量快速繁殖出生长速度快、品质优和染菌率低的丹参组培苗。 

为达到上述目的，本发明采用的以嫩茎段为外植体的川丹参1号组织培养快繁方法，步骤如下： 

1.选择外植体：选取川丹参1号带顶芽和带节的嫩茎段2～4cm为外植体； 

2.消毒处理：将步骤1的嫩茎段经自来水冲洗、洗衣粉液清洗后，流水冲洗30min，超净工作台上用无菌水冲洗1～3次，75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗2～4次，再用0.1％HgCl2并滴加3-5滴吐温-80消毒5-7min，然后用无菌水冲洗5次以上； 

3.诱导培养：从消毒后的材料上切取0.5～1.5cm带顶芽或带节的丹参嫩茎段接种到诱导培养基上培养小苗；所用培养基为MS+0.6mg/L6-BA+琼脂+蔗糖，琼脂浓度为8.0g/L，蔗糖浓度为30.0g/L；用1mol/L的HCl或NaOH调节pH为5.8～6.0；