[发明专利]分离及培养大胚龄人神经干细胞原代细胞的方法无效
| 申请号： | 201110447680.8 | 申请日： | 2011-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN102443569A | 公开（公告）日： | 2012-05-09 |
| 发明（设计）人： | 吴卫江 | 申请（专利权）人： | 吴卫江 |
| 主分类号： | C12N5/0797 | 分类号： | C12N5/0797 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214000 江苏省无*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分离 培养 大胚龄人 神经 干细胞 细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种分离及培养大胚龄人神经干细胞的原代细胞的方法，其包括如下步骤：
取大胚龄水囊引产的新无菌条件下分离出大脑皮层组织，剥除脑分成小块后在PBS液中漂洗三次洗去血细胞，用细吸管轻柔吹打至组织碎块完全散开，离心洗涤后吹打制成悬液；
使用200目尼龙滤网过滤，制成单细胞悬液，无血清培养基，台盼蓝染色计数活细胞，调整细胞浓度为1×107/ml；以及
将原代细胞短暂贴壁2次去除成纤维细胞，分别种植于未包被的培养瓶，37℃，5％CO2条件下静置培养。
2.如权利要求1所述的分离及培养大胚龄人神经干细胞的原代细胞的方法，其中所述培养方法包括悬浮细胞培养法和贴壁培养细胞法。
3.如权利要求2所述的分离及培养大胚龄人神经干细胞的原代细胞的方法，其中所述悬浮细胞培养法是在高细胞密度培养7天后首次换液时重新计数活细胞，以1×105/ml密度分瓶继续培养。
4.如权利要求2所述的分离及培养大胚龄人神经干细胞的原代细胞的方法，其中所述贴壁细胞培养法在每次换液时吸取上悬液离心后加新鲜培养基种入新的培养瓶，原瓶中仅保留贴壁细胞，加入新鲜培养基继续培养。
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