[发明专利]一种抗TOM22蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

  

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体而言本发明提供一种单克隆抗体，该抗体能特异识别线粒体中的Tom22蛋白；以及所述抗体在制备用于治疗肝脏疾病的药物中的应用，本发明还提供药物组合物，其包含所述单克隆抗体作为活性成分。 

  

背景技术

抗体作为疾病预防、诊断和治疗的制剂已有上百年的发展历史。随着基因工程抗体技术的发展和完善，抗体药物已从鼠单克隆抗体发展到人鼠嵌合抗体、人源化抗体及人源抗体。截至2010年美国FDA已批准超过40个抗体药物。此外还有超过120种抗体药物处于临床研究，超过500种抗体药物处于临床前研究。这些抗体主要应用于自身免疫性疾病、感染性疾病以及肿瘤的治疗。 

线粒体含有1000-2000种蛋白质, 作为半自主性细胞器，其中，2%是由线粒体基因编码；98%的蛋白是由核基因编码的，它们经胞质核糖体合成后转运进入线粒体，每一种蛋白在特定位置才能发挥功效，所以定向的将蛋白质转运至线粒体的各部位十分重要。Tom复合体作为线粒体前体蛋白进入线粒体的门户，它调节未折叠的前体蛋白通过线粒体外膜。Tom复合体包括核心亚基Tom40、Tom22、Tom5、Tom6和Tom7,以及外周亚基Tom20和Tom70。其中hTom22、Tom20以及Tom7是线粒体前体蛋白定位到线粒体上的受体；Tom40是Tom复合体的核心组成，形成了蛋白转运的通道（GIP）；Tom5、Tom6和Tom7具有组装以及稳固Tom复合体的功能。它们各司其职，实现线粒体前体蛋白的转运。 

线粒体的不同前体蛋白的转运不是一个重复的过程，具有不同的路径，不同的机制，分别定位于外膜、内膜、基质以及膜间隙。高文祥等的“线粒体蛋白转运的研究进展”综述了有关转位分子介导的线粒体蛋白转运的研究进展，从不同复合物介导蛋白转运角度出发叙述线粒体前体蛋白的转运途径：TOM-TIM23介导内膜蛋白转运、TOM-TIM22介导内膜蛋白转运、TOM-SAM介导外膜蛋白转运、IMS蛋白转运以及OXA1复合物介导蛋白向外转运。孟紫强等的文章中简述了线粒体前体蛋白转运过程中的有意义部分：转运需要的能量、分子伴侣、线粒体前体蛋白的导肽、Tom复合体、Tim复合体以及位于膜间隙的异型多亚基蛋白质复合物的作用。而杨福愉的“蛋白质跨线粒体膜的运送”一文中从转送的目标位点出发，阐述了定位于基质蛋白质运输途径、定位于外膜的蛋白质运送途径、定位于膜间隙的蛋白质运输途径。 

hTom22是线粒体外膜上转运线粒体前体蛋白的重要组成成分。hTom22 由三部分组成包括N-端、C-端以及虚拟存在的横跨膜。hTom22 N-端暴露在细胞溶质区域，富含84个酸性氨基，包括19个负电荷域以及9个正电荷域。这一区域主要是通过静电作用与线粒体前体蛋白带正电荷的导肽（含有将要到达线粒体部位的信息，致使线粒体前体蛋白准确定位）结合，是线粒体前体蛋白结合的受体领域之一。对于组装hTom22以及定位于线粒体外膜上hTom22正电荷域发挥着重要的作用，但是Court DA 等提出hTom22的负电荷域却不是必需的成分，也不是线粒体前体蛋白的结合以及转运的必要成分。TOM22 N-端的转移膜螺旋束缚着Tom40的两个亚基，这样的作用并不影响线粒体前体蛋白的前序列。hTom22 C-端即IMS功能域暴露在膜间隙区域具有将自身组装成Tom复合体以及转运前体蛋白的作用，但是对于前体蛋白的定位以及结合不是必需的组成部分。hTom22的IMS功能域对于TOM22-TIM23前体蛋白三聚物的稳定性是必需的。hTom22的IMS功能域和Tim23 N-末端50个氨基酸残基的片段可以促使前体蛋白由TOM复合物转运至TIM23复合物。DEBORAH A. COURT通过中断方法使N. crassa的基因失活，使用遗传学的方法分析特定突变的等位基因。通过实验产生了2种hTom22突变蛋白（缺乏2/3或者整个IMS），发现hTom22的IMS域不是hTom22组装成Tom复合体必须的组成部分，也不是线粒体前体蛋白的转运到线粒体的至关重要的组分，但是对于反式结合位点识别的前体蛋白的转运具有提高效率的作用。hTom22的IMS可以方便的将线粒体前体蛋白释放到线粒体外膜的脂质双分子中或是IMS，也是Tom复合体与线粒体内膜的接口。