[发明专利]HIP/PAP重组腺病毒及其抗溃疡性结肠炎的应用

说明书

技术领域

本发明属于溃疡性结肠炎的治疗技术领域，涉及HIP/PAP重组腺病毒及其抗溃疡性结肠炎的应用。

背景技术

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)为原因不明的以黏膜坏死和炎症为主要病理表现的疾病，其发病率在中国逐年上升，而且呈现重症患者越来越多的趋势。目前临床上对UC的治疗主要以氨基水杨酸和激素制剂为主，但是对部分UC尤其是重症患者效果差。近年来在临床上应用生物制剂包括抗肿瘤坏死因子、α₄β₇整合素、CD₂₅等单克隆抗体治疗UC，但也只对部分患者有效，同时其应用后的副作用也限制了患者的使用，所以迫切需要研制出安全、良效的新的UC治疗药物和方法。

肝肿瘤-肠道-胰腺基因(HIP/PAP)，是新近发现的一种在炎症组织和肿瘤组织中表达的分泌蛋白，结构上属于血凝素家族。具有抑制炎症、抗细胞凋亡、促进细胞增殖等作用。在炎症性肠病发生过程中，HIP/PAP在早期阶段即表达上调，具有与IL-10类似的抗炎作用，是一种强有力的抗炎因子，对TNF-α亦具有强大的抑制作用。HIP/PAP在胃肠道由潘氏细胞分泌，能诱导细菌聚集防止细菌扩散，从这个角度来说HIP/PAP是一种保护性蛋白，在组织炎症及损伤等易致细菌感染的情况下，能保护组织免受细菌的侵袭。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种HIP/PAP重组腺病毒及其抗溃疡性结肠炎的应用，通过重组病毒介导使HIP/PAP在肠道病变局部高效表达，起到加快溃疡性结肠炎愈合的效果。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种HIP/PAP重组腺病毒，其基因组中克隆有如SEQ.ID.NO.1所示的HIP/PAP基因。

所述的重组腺病毒是将HIP/PAP基因克隆入腺病毒表达载体，转染细胞后进行腺病毒包装而得到。

所述的腺病毒表达载体为重组腺病毒载体pAd-HIP/PAP，所述的宿主细胞为AD293细胞；

将HIP/PAP基因克隆入pShuttle-CMV载体后得到pShuttle-CMV-HIP/PAP载体，再将其转化入含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞，进行同源重组后得到重组腺病毒载体pAd-HIP/PAP。

HIP/PAP分子应用于抗溃疡性结肠炎药物的制备。

所述是促溃疡性结肠炎引发的TNF-α及IL-6表达下调的药物的制备。

所述是减少结肠黏膜氧化损害的药物的制备。

所述是促进结肠黏膜上皮细胞增殖的药物的制备。

所述的HIP/PAP分子是通过包含HIP/PAP基因的外源性表达载体在炎症局部的表达而产生。

所述的包含HIP/PAP基因的外源性表达载体是构建于腺病毒基因组中，由重组腺病毒进行介导转染。

所述的包含HIP/PAP基因的外源性表达载体为重组腺病毒载体pAd-HIP/PAP，将HIP/PAP基因克隆入pShuttle-CMV载体后得到pShuttle-CMV-HIP/PAP载体，再将其转化入含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞，进行同源重组后得到。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明公开了一种可用于治疗溃疡性结肠炎的新分子HIP/PAP，成功构建了表达HIP/PAP的重组腺病毒Ad-HIP/PAP，通过重组腺病毒灌肠的方法使HIP/PAP在大鼠结肠黏膜内高效表达。结果表明，HIP/PAP表达上调后，溃疡性结肠炎大鼠体重减轻不明显，便血及腹泻情况较对照组相比明显缓解，处死大鼠后观察结肠黏膜溃疡及炎症明显减轻，促炎因子表达显著下调，结肠黏膜氧化损害明显减轻，此外，HIP/PAP亦可促进结肠黏膜上皮细胞增殖，从而促进结肠黏膜修复，加速溃疡愈合，对大鼠溃疡性结肠炎有显著的治疗作用。