[发明专利]一种具有自生固氮能力的土壤杆菌及其应用

权利要求书

1.一种具有自生固氮能力的土壤杆菌，其分类命名为土壤杆菌（Agrobacterium sp.）Ymu6-2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5007。

2.根据权利要求1所述的具有自生固氮能力的土壤杆菌，其特征在于该菌株具有以下特性：Ymu6-2在固体培养基A上菌落呈乳白色，圆形凸起，边缘整齐，菌落周围有透明圈，G^-，好氧或兼性厌氧，扫描电镜显示呈粗短杆状，其最适的生长温度28~32℃，最适的pH值为6.0~8.0；在固体培养基A上能够耐受400-800mg/l的Cd²⁺生长，在液体培养基A中能够耐受224-448mg/l的Cd²⁺生长，其固氮能力在0.56~0.73nmol·10⁷cfu^-1·h^-1，解无机磷能力为264.5mg/l，产吲哚乙酸的能力为15.25.~30.6μg/ml，产铁载体的能力为0.806~0.402，无ACC脱氨酶活性；

所述的固体培养基A组成为：酵母粉5-10g， NaCl 2-5g，蛋白胨5-10g，FeSO₄ ·7H₂O 0.005-0.01g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.0025-0.005 g，琼脂粉15-20g，蒸馏水1000ml，pH 7.0~7.2。

3.含有权利要求1所述土壤杆菌的微生物菌剂。

4.权利要求3所述微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：

1)菌种发酵

①一级三角瓶液体培养

将冻存的Ymu6-2在37℃条件下快速解冻，按照0.5-1%的接种量分别接入装有液体培养A的三角瓶中，28-32℃,振荡培养15-20hrs；

培养基A组成为：酵母粉5-10g， NaCl 2-5g，蛋白胨5-10g，FeSO₄ ·7H₂O 0.005-0.01g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.0025-0.005 g，蒸馏水1000ml，p H 7.0~7.2；

②二级发酵罐发酵

1）将Ymu6-2的一级培养液按照5-10%的接种量分别接入装有液体培养基E的发酵罐中，进行发酵培养,罐温28-32℃，培养pH7-8，通气培养20-30 hrs；

所述的培养基E组成为：蔗糖10-15g，淀粉2-3g，豆粕20-30g，KH₂PO₄ 0.2-0.41 g, K₂HPO₄ 0.3-0.52 g, CaCl₂ 0.1-0.2 g, MgSO₄·7H₂O 0.1-0.2 g ，Na₂MoO₄·2H₂O 0.0025-0.005 g, 水1000ml，p H 7.0~7.2；

2）将秸秆粉、草炭土、稻糠粉碎过60目筛，按照质量百分比为50-70:20-30:10-20的比例均匀混合，再加入钼酸钠和硫酸亚铁，其中钼酸钠为0.2~0.5g/Kg，硫酸亚铁为0.05~0.08g/Kg；

3）将步骤1）中得到的Ymu6-2发酵液直接打入储液罐，即得液态高效固氮菌剂，将得到的液态高效固氮菌剂按照50-100ml/kg的剂量与步骤2）中所得的固态基质混匀，28-32℃发酵5-7天即可。

5.权利要求1所述土壤杆菌在土壤重金属污染环境治理中的应用。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于重金属为镉离子。

7.根据权利要求5所述应用，其特征在于使用方法为：在植物浸种时以50-100倍的液体菌剂稀释液浸泡种子或植物根部2-5hrs，育苗期或生长期灌根采用100-500倍的液体菌剂稀释液20-40ml/Kg土壤剂量浇灌稀释液，整个生长期灌根1-3次；固态菌剂作为基肥和追肥使用，使用剂量为5-20g/Kg土壤。

8.权利要求1所述土壤杆菌在土壤生态修复中的应用。