[发明专利]丁丙诺啡检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物学免疫方法的测定技术领域，特别是涉及一种利用胶体金免疫层析技术制作的一种丁丙诺啡检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

丁丙诺啡是一种兼具有阿片受体激动和拮抗活性的药物，它是一种高亲脂性药物，注射或舌下含化起效都比较快，低剂量能显示阿片受体的激动活性，高剂量则出现阿片受体拮抗作用。目前丁丙诺啡有针剂和片剂，许多国家和我国许多地方也都使用丁丙诺啡来对海洛因成瘾者进行戒毒治疗。但由于它极易形成依赖的特性，因此，各国对它使用情况的控制也极为严格，我国把它列为第1类精神药品进行管制。

丁丙诺啡除了它的药用作用外，还有比较严重的副作用，副作用与其它阿片类药物相似，最常见的有：易成瘾、神经系统损害、记忆力下降、失眠、嗜睡、出汗、便秘、头痛、恶心，可能引起高血压和诱发高血压，呼吸抑制等等。据报道丁丙诺啡有两种很危险的滥用情况：一是药片不恰当的用作静脉注射或过大剂量的口服；二是与其他镇静类药物(如地西泮、酒精)合用，这样使用易引起呼吸抑制，昏迷、甚至死亡。所以吸毒学员在远离海洛因毒品的同时也应不要滥用“丁丙诺啡”、“安定”以及各种种样的软性毒品，同样它们也身体造成极大的损害。

有关丁丙诺啡的检测方法有很多，例如：薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法等方法，这些方法虽然检测的灵敏度较高，检测结果准确，但是存在需要昂贵的仪器设备，对检测材料的要求高，需要提纯处理等限制。因此研究具有快速、便携等优点的检测方法具有现实意义。本发明介绍了一种以胶体金免疫层析法快速检测丁丙诺啡的检测试剂盒及其制备方法，该方法具有简单、快速，无需任何仪器设备，经济实用等特点，适用于快速定性检测样本中是否含有丁丙诺啡。

胶体金免疫层析技术是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、免疫层析技术及胶体金显色技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。基于胶体金免疫层析技术可以制备胶体金试纸，胶体金试纸的原理是应用胶体金标记技术，以胶体金为示踪物，利用抗原抗体特异性结合反应，利用特定的显色反应在试纸上的显色而判定检测的结果，具有操作简单、检测快速、灵敏度高、特异性强，无须复杂的仪器等特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单、快捷、灵敏度高、特异性强的丁丙诺啡试剂盒及其制备方法，用于检测待检样本中是否含有丁丙诺啡。

一种用于检测丁丙诺啡的检测试剂盒，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸样垫和PVC支撑板，在PVC支撑板上依次紧密粘附有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫。所述样品垫为玻璃纤维；所述胶体金垫为胶体金标记的丁丙诺啡单克隆抗体聚酯膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有检测线(T线)和质控线(C线)，其中检测线(T线)上包被了丁丙诺啡-BSA偶联抗原，质控线(C线)上包被了羊抗鼠IgG多克隆抗体；所述吸样垫为吸水纸。

本发明采用纳米胶体金技术及抗原抗体特异性反应，应用免疫竞争抑制反应的原理制备而成，通过待检样本中含有的丁丙诺啡与硝酸纤维素膜上检测线(T线)包被的丁丙诺啡-BSA偶联抗原竞争结合胶体金标记的丁丙诺啡单克隆抗体，通过T线的显色来判定待检样本中是否含有丁丙诺啡。

本发明提供了一种丁丙诺啡检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备丁丙诺啡偶联抗原

将丁丙诺啡与BSA偶联，合成丁丙诺啡-BSA偶联抗原，作为丁丙诺啡偶联抗原。

(2)制备丁丙诺啡单克隆抗体

采用丁丙诺啡-BSA偶联抗原为免疫原免疫BALB/C小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株；以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得丁丙诺啡单克隆抗体。

(3)制备胶体金

取90ml纯化水于洁净的圆底烧瓶中，于电磁加热套中搅拌并加热，等待沸腾后，加入4ml 1％的氯化金溶液，继续搅拌1min，迅速加入6ml 1％的柠檬酸三钠，溶液颜色由浅黄变成黑色最后变成酒红色，继续加热5min，取出冷却到室温，常温避光保存。这样制成的胶体金颗粒的大小为20-40nm。

(4)制备胶体金垫