[发明专利]一种类短短芽孢杆菌及其制备的蛋白系列的方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种类短短芽孢杆菌及其制备的蛋白系列的方法和用途。 

背景技术

心脑血管疾病的死亡率一直居于第二位，其中血栓性疾病是发病率、致残率和死亡率最高的。血栓性疾病是指循环血液中有血栓形成及血栓从局部脱落随血流至前方血管内，阻塞或部分阻塞血管腔，导致血栓栓塞的一类疾病。针对血栓性疾病，现行采用的临床疗法共有三种：即外科手术、抗栓疗法和溶栓疗法。手术治疗必须明确栓塞的位置，实施起来比较困难并存在危险性；抗栓疗法是运用药物控制血栓再形成，而对已经形成的血栓无效；溶栓治疗是使用药物溶解已经形成的血栓，使被阻塞的血管重新疏通。目前溶栓治疗是研究的重点。 

溶栓疗法是利用溶栓剂直接溶解血栓或通过激活血液中的血纤维蛋白溶解酶原转化为纤维蛋白溶酶来催化血栓的主要基质血栓纤维蛋白水解。临床上已正式批准使用的溶栓剂大致分成三代，第一代：链激酶（Streptokinase）、尿激酶（Urokinase）；第二代：阿尼普酶（Anistreplase）、重组型组织纤溶酶原激活剂（Alteplase，recombinant human tissue-type plasminogen activator）；第三代：瑞替普酶（Reteplase）、替奈普酶（Tenecteplase）、拉诺替普酶（Lanoteplase）、葡萄球菌激酶（Staphylokinase）。 

上述药物在治疗血栓病上已经取得了显著的成绩，但离理想的溶栓药物还有一定的距离，其缺点是溶栓特异性不高，半衰期短，容易引起内出血等。理想的溶栓药物应该具有安全、有效、给药方便、特异性强、半衰期长、能溶解陈旧血栓，复发率低、无出血等副反应、价格合理等特点。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是：克服已有抗血栓药物存在的溶栓特异性不高，半衰期短，容易引起内出血等缺点，本发明提供一种类短短芽孢杆菌GYZC01，用其制备的分子量大于7000D的蛋白质系列可用于制备溶血栓药物，效果良好。 

本发明的另一个目的是提供类短短芽孢杆菌制备蛋白质系列的方法。 

本发明的一种类短短芽孢杆菌，其分类命名为类短短芽孢杆菌(Brevibacillus parabrevis) GYZC01，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号为：CCTCC NO: M 2011461，保藏日期为：2011年12月11日。本发明的类短短芽孢杆菌(Brevibacillus parabrevis) GYZC01是一种存在于土壤中的革兰氏阳性菌，是从贵州大学蔡家关校区的土壤中分离到一株细菌，在普通琼脂平板中能生长，最适培养温度为30℃，菌落呈灰黄色，菌体长3-4微米、宽0.5-0.8微米，需氧，能利用柠檬酸盐、铵盐，不能利用硝酸盐，能水解酪蛋白、明胶，能利用葡萄糖、果糖、麦芽糖产酸、产气，不能分解乳糖，其蛋白质系列具有溶血栓的作用，经鉴定，菌株 GYZC01为类短短芽孢杆菌(Brevibacillus parabrevis)。 

所述的类短短芽孢杆菌(Brevibacillus parabrevis) GYZC01的16S rRNA具有 SEQ ID NO：1的序列，将所得序列通过 Blast 程序与 GenBank 中核酸数据进行比对分析，其系列与Brevibacillus parabrevis M3; AB215101菌株具有99%的相似性，与其他Brevibacillus parabrevis菌株的相似性在97-98.5%之间。由此判断GYZC01属于新菌株。进一步用MEGA5.0建立系统进化树，也证明GYZC01为新菌株。 

所述的一种类短短芽孢杆菌制备蛋白质系列的方法，将含有类短短芽孢杆菌GYZC01的细菌发酵液冷冻过夜，在室温融解，得到冻解液，冻解液置离心机离心，收集上清液，上清液逐渐加入硫酸铵粉，直至饱和，过夜收集沉淀，沉淀物用透析袋透析，得到蛋白质系列。 

所述的一种类短短芽孢杆菌制备蛋白质系列的方法，蛋白质系列的分子量大于7000D。 

所述的蛋白质系列在溶血栓药物的应用。 

    本发明的类短短芽孢杆菌(Brevibacillus parabrevis)GYZC01株用27f和1492r为引物进行PCR扩增出菌的16S rRNA碱基大小为1392 bp，序列见说明书最后的核苷酸或氨基酸序列表。 

本发明达到的有益效果：