[发明专利]肌红蛋白检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫学领域，涉及一种免疫检测试剂，进一步地，本发明涉及一种肌红蛋白检测试剂盒。

背景技术

肌红蛋白(myoglobin，MB)是骨骼肌和心肌特异性氧结合蛋白，分子量为17.8kD，由于分子量较小，当心肌或骨骼肌损伤时，MB会从肌肉组织释放到循环血中，并且能经肾小球滤过，出现在尿中。因此血液和尿中MB测定可用于某些肌病和心脏病的诊断，如急性心肌梗死(AMI)、急性肌损伤、急慢性肾衰竭、严重充血性心力衰竭、长时间休克、肌营养不良、肌萎缩和多发性肌炎等疾病。

AMI是一种严重危及人类生命的疾病，目前AMI检测的主要生化标志物有肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDL)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌红蛋白和心肌肌钙蛋白I(cTnI)等，但CK-MB、LDL、cTnT、cTnI在诊断心肌梗死时的敏感性都不如MB高。MB在AMI后2～4h内，血中浓度迅速升高，8～10h后达到最高峰，研究表明MB阴性特别有助于排除AMI，可协助AMI早期诊断。由于MB在血液中的半衰期短，升高后24h内即恢复至正常水平，因此可作为观察有无再梗死及梗死有无扩展的指标。另外，MB还可作为AMI溶栓中评价再灌注与否的较敏感指标。

现有的MB检测方法主要有放射性免疫法、酶联免疫法，化学发光法和酶联荧光分析法。放射性免疫法使用放射性同位素，会造成环境污染；酶联免疫法测定周期长，不适合急诊的快速检测；化学发光法和酶联荧光分析法价格昂贵，需要专门仪器和专业人员操作，只适用于中心实验室使用，不适合中小医院尤其是没有中心实验室的乡镇医院。而胶乳增强免疫比浊法操作简单，经济，无污染，可以在绝大多数医院的自动生化分析仪上使用，特别是对急诊能实现快速定量检测，其基本原理是：将抗体包被在胶乳颗粒上，与相应抗原发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物所产生的浊度，即可测出标本中被检物含量。

而抗体包被到胶乳上，一般可采用物理吸附法和化学偶联法，采用物理吸附法得到的致敏胶乳颗粒稳定性差，抗体容易从胶乳颗粒上脱落下来；而且用物理吸附法得到的胶乳，有可能受到类风湿性因子(RF)和嗜异性抗体的干扰，从而导致检测结果假阳性或假性升高。目前，采用的化学偶联法多为随机偶联法，因随机偶联的抗体会随机偶联到胶乳生物不同部位，将导致抗体损失结合力，增加了抗体用量和生产成本；若将上述方法得到的致敏胶乳颗粒用于检测试剂盒中，会造成特异性差、准确性低、抗干扰能力弱或生产成本高的缺陷。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种检测简单而快速、灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强及生产成本低的肌红蛋白检测试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种肌红蛋白检测试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为适当的缓冲液；所述的试剂R2是用肌红蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒、置于适当的缓冲液中。

所述的肌红蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒在R2中的浓度为0.08％～0.28％(即0.08～0.28克/100ml)。

本发明所述的缓冲液包括但不限于PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液、氯化铵缓冲液以及其他具有相似性质的缓冲液中的一种或几种。

本发明上述试剂盒中R1所用的缓冲液与配制R2所用的缓冲液只要为上面的缓冲液中的一种即可，可以为相同的缓冲液，可以为不同缓冲液。

本发明上面所述的聚苯乙烯胶乳颗粒(该聚苯乙烯胶乳颗粒为市售常规产品)，其平均粒径在0.01～1.5μm(10～1500nm)之间，粒径小于0.01μm时，胶乳颗粒聚集产生的光密度变化太小，结果很难达到试验敏感度要求，在制备试剂的时候，需要花费过多的离心时间，延长了试剂生产的时间，增加了试剂成本且不利于重复性。而粒径大于1.5μm的胶乳颗粒在测量高浓度检测物时，其聚集产生的光密度变化超过了检测限，结果很难获得对应于分析物浓度的光密度变化，而且颗粒太大会加速自聚集，导致分散性降低。胶乳颗粒粒径随着试验方法和设备的改变而改变。所选择的颗粒粒径最好是介于0.05～0.5μm(50～500nm)之间。

本发明上面所述的抗体包括但不限于多克隆抗体及单克隆抗体。

在本发明所述的MB检测试剂盒中，还包含MB校准。

本发明所述的试剂R2是用MB抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于适当的缓冲液中组成，该试剂R2的制备步骤包括：