[发明专利]对虾补体1q结合蛋白及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种对虾补体结合蛋白的基因序列，更具体涉及一种从斑节对虾肝胰腺cDNA文库中同源克隆出来一个补体1q结合蛋白基因的序列、氨基酸序列、时空表达图谱，本发明还涉及该基因的用途。

背景技术

补体系统的主要生理功能是促进吞噬和溶解靶细胞，消除外来抗原的侵害，是机体免疫防御机制的重要组成部分。补体被外来抗原激活通过两个途径：(1)经典途径，被IgM和IgG复合物或碳水化合物激活；和(2)替代途径，被非已表面分子或细菌内毒素激活。两个途径终极效果，是通过在细胞表面形成膜攻击复合物，从而导致补体的激活。补体C1q是经典激活途径中的起始成分之一，是各种补体分子中分子量最大(410kDa)的γ球蛋白。C1q通过其胶原区的肽链相互聚合，从而增强B细胞产生Ig的作用。

另一方面，在一些非免疫性因素的刺激下，补体系统的活化又可产生炎症反应，并影响凝血及纤溶系统，导致机体正常组织细胞的损伤。现已研究证明，补体的过度激活将导致多种疾病，例如急性胰腺炎、阿尔茨海默病、银屑病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、中风、心肌梗死、溶血性贫血、血液透析、多系统器官衰竭等(Sahu，Lambris et al.，2000)。因此抑制过度激活的补体级联反应，调节机能恢复动态平衡，对患此疾病获症状的人有所裨益。

补体1q结合蛋白是一种高度糖基化的蛋白，其特异性结合C1q胶原样结构域，调控补体1q的活性，从而抑制补体系统过度激活。同时，C1qBP是丝裂原蛋白酶的底物，是MAPK激酶级联反应的一部分，与细胞多种生理过程，如细胞生长、发育、分裂、死亡等密切相关。此外，某些病毒在进化过程中演变出利用补体1q进入宿主细胞的侵染策略。

因此，对补体1q结合蛋白的研究，将有助于了解多种生理活动。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种对虾补体1q结合蛋白的cDNA及由其编码的氨基酸。

本发明的第二个目的在于提供含有上述对虾补体1q结合蛋白的cDNA的表达载体。

本发明的第三个目的在于提供一种制备重组对虾补体1q结合蛋白的方法及由该方法制备的重组对虾补体1q结合蛋白。

本发明的第四个目的在于提供一种能与上述重组对虾补体1q结合蛋白特异性结合的抗体。

本发明的最后一个目的在于提供上述能与重组对虾补体1q结合蛋白特异性结合的抗体在制备虾类抗病或增强虾类免疫力药物中的应用及其在制备虾类生殖调控药物中的应用。

本发明的第一个目的是通过如下技术方案来实现的：一种对虾补体1q结合蛋白的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

上述对虾补体1q结合蛋白，它的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。其核苷酸和氨基酸序列的对照如SEQ ID NO.3所示。

本发明上述对虾补体1q结合蛋白(以下简称C1qBP)的cDNA，其具体通过如下方法获得：通过以近源物种C1qBP基因的CDS序列的保守区设计的兼并引物，并用PCR法扩增，结合RACE技术克隆到斑节对虾C1qBP基因的全表达序列。C1qBP又称p32，它与补体分子C1q的胶原样区结合，调控补体系统的经典途径。斑节对虾C1qBP基因包括120bp 5’-非翻译区序列，401bp 3’-非翻译区序列。该基因编码263个氨基酸组成的蛋白，分子量为29kd。该基因在卵巢和免疫器官中高表达，并被外源刺激诱导表达，可在制备虾类抗菌抗病毒，以及卵巢发育和生殖调控药物中的应用。

本发明的第二个目的是通过如下技术方案来实现的：一种表达载体，所述的表达载体包含上述对虾补体1q结合蛋白的cDNA。

本发明的第三个目的是通过如下技术方案来实现的：一种制备重组对虾补体1q结合蛋白的方法，包括用上述表达载体转化寄主细胞，培养转化体，获得重组的对虾补体1q结合蛋白。

其中，本发明所述的寄主细胞是原核或真核细胞。优选为大肠杆菌。

本发明提供的一种重组对虾补体1q结合蛋白，包括用上述表达载体转化寄主细胞，培养转化体，从培养物获得重组的对虾补体1q结合蛋白的步骤的方法制备获得。

本发明的第四个目的是通过如下技术方案来实现的：一种能与上述重组对虾补体1q结合蛋白特异性结合的抗体。包括将上述DNA序列表达的原核或真核表达的重组蛋白，免疫鼠、鸡等实验动物获得多克隆或单克隆抗体。

本发明的最后一个目的是通过如下技术方案来实现的：重组对虾补体1q结合蛋白在制备虾类抗病毒或增强虾类免疫力药物中的应用。或上述重组对虾补体1q结合蛋白在制备虾类生殖调控药物中的应用。