[发明专利]一种柱层析法制备高纯甘油磷脂酰乙醇胺的方法

说明书

技术领域

本发明是一种制备高纯甘油磷脂酰乙醇胺(L-alpha glycerylphosphorylethanolamine，L-α-GPE)的方法，属于磷脂深加工技术领域。

背景技术

甘油磷脂酰乙醇胺(L-alpha glycerylphosphorylethanolamine，L-α-GPE)，是磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)分子上的两个脂肪酰基完全被分解掉的产物，可用于医药行业，作为主要的有效成分，与适当的药物载体相辅助，用于治疗由于大脑退化或脑血管功能不全引起的慢性脑部神经组织综合症。其结构式中R基团的结构式为CH₂CH₂NH₂，区别于大豆粉末磷脂的的其他醇解产物，如甘油磷脂酰胆碱(L-α-GPC)、甘油磷脂酰丝氨酸(L-α-GPS)等。由于磷脂组成复杂，其产品的组成也十分的复杂，因而导致甘油磷脂酰乙醇胺(L-α-GPE)的分离比较困难。

柱层析法，采用离子交换树脂为介质，对反应原料的纯度要求不高，工艺十分简单，所得产品的纯度很高，在分离出L-α-GPE得同时，还可以很好的将L-α-GPC从反应混合液中有效地分离出来，而离子交换树脂来源广泛，成本较低，因此该法可以适用于工业生产。目前，国内尚未出现有关L-α-GPE的研究报导。

发明内容

本发明的目的是提供一种高纯L-α-GPE的制备方法。其特征是以大豆粉末磷脂为原料，在无水甲醇体系中，采用甲醇钠作为催化剂，反应生成含有L-α-GPE的混合液，然后采用两种离子交换树脂柱层析法进行分离纯化，以L-α-GPE的纯度为主要指标，通过对反应条件、树脂型号及解吸液进行选择优化，确定制备纯化工艺。

本发明的技术方案：

(1)以大豆粉末磷脂为原料，在无水醇相体系中，采用甲醇钠催化进行化学醇解反应，反应产物采用蒸发光散射-高效液相色谱法(HPLC-ELSD)检测其中L-α-GPE的含量，考察反应温度、反应时间、催化剂添加量和料液比对反应的影响并确定最佳工艺条件。

(2)在确定了醇解反应最佳条件的基础上，采用静态吸附和静态解吸法对树脂进行筛选。

(3)将选择的树脂装柱后，采用不同的解吸液对柱进行解吸，以L-α-GPE的纯度和解吸曲线为主要参考指标，确定出最适解吸液。

本发明的有益效果：

(1)采用柱层析法制备纯化甘油磷脂酰乙醇胺，所得L-α-GPE产品的纯度超过98％，并同时得到了纯度超过95％的GPC产品，属于开创性研究。

(2)大豆粉末磷脂来源广泛，目前在食品医药行业主要作为乳化剂和辅料，本发明拓展了磷脂的应用范围。

(3)采用离子交换树脂作为分离介质，成本较低，工艺简单，并且树脂可以通过再生重复利用，具有较高的工业发展前景。

附图说明

图1甘油磷酸类化合物的结构式

图2化学反应后混合溶液的高效液相色谱图

图3所得GPE的高效液相色谱图

图4所得GPC的高效液相色谱图

具体实施方式

实施例1

称取250g大豆粉末磷脂于烧杯中，加入1L无水甲醇，快速搅拌使体系中的粉末磷脂均匀扩散，然后加入甲醇钠12g，于35℃下搅拌6h，抽滤，所得清液调节pH至9左右。量取200ml甲醇浸泡的D001树脂，装柱，400ml甲醇冲洗柱，以1.5mL/min的流速将上述大豆粉末磷脂的醇解溶液上样，上样结束后，先用1L甲醇洗脱，然后用pH＝6.78的超纯水对柱进行解吸。将此解吸液再次上样至装有100mL201×7树脂的层析柱(400mL水冲洗)中，柱下流出液为GPC水溶液，上样结束后用水冲洗至GPC完全流出，检测GPC的纯度为97.11％，然后采用1％乙酸解吸，所得解吸液即为GPE水溶液，于60℃下减压蒸馏，得到淡黄色透明高黏度液体，检测其纯度为99.8％。

实施例2

称取250g大豆粉末磷脂于烧杯中，加入1.25L无水甲醇，快速搅拌使体系中的粉末磷脂均匀扩散，然后加入甲醇钠10g，于35℃下搅拌19h，抽滤，所得清液pH至8左右。量取100ml甲醇浸泡的D001树脂，装柱，200ml甲醇冲洗柱，以2.0mL/min的流速将上述大豆粉末磷脂的醇解溶液上样，上样结束后，先用1L甲醇洗脱，然后用pH＝5.01的超纯水对柱进行解吸。将此解吸液再次上样至装有200mL201×7树脂的层析柱(400mL水冲洗)中，柱下流出液为GPC水溶液，上样结束后用水冲洗至GPC完全流出，检测GPC的纯度为95.72％，然后采用1％乙酸解吸，所得解吸液即为GPE水溶液，于60℃下减压蒸馏，得到淡黄色透明高黏度液体，检测其纯度为98.37％