[发明专利]一种从单粒稻米胚乳中提取高质量基因组DNA的方法

权利要求书

1.一种从单粒稻米胚乳中提取高质量基因组DNA的方法，其特征在于包括以下步骤：

1） 去除稻壳、种皮、果皮、胚的单粒稻米，经牛皮纸包裹后，用研磨棒砸碎装入1.5 mL离心管；

2） 加入800 μL洗涤液于摇床上120 rpm振荡5 min去除多糖，4,000 rpm离心2 min，丢弃上清液后收集沉淀；

3） 在沉淀中加入600 μL DNA提取缓冲液，漩涡振荡使沉淀悬浮并上下颠倒混匀，而后置于65°C水浴45 min以裂解细胞；

4） 待上述混合物冷至室温后加入600 μL苯酚：氯仿：异戊醇体积比为25：24：1的苯酚-氯仿-异戊醇混合液，于摇床上120 rpm振荡5-10 min至乳白色，12,000 rpm离心5 min，定量吸取500 μL上清液至另一新离心管，再加入500 μL氯仿：异戊醇体积比为24：1的氯仿-异戊醇混合液，于摇床上120 rpm振荡5-10 min至乳白色，12,000 rpm离心5 min后，定量吸取400 μL上清液至另一新离心管，加入40 μL pH=5.2的5 M醋酸钾溶液和293 μL异丙醇混匀，于4°C放置2 h，12,000 rpm离心10 min，丢弃上清液，收集DNA沉淀，加入1 mL 体积比为70%的乙醇后轻弹管底使沉淀悬浮，于摇床上120 rpm振荡2 min，7,000 rpm离心3 min，丢弃上清液，室温下干燥沉淀，加入100 μL去离子水溶解沉淀，获得DNA粗提液；

5） 向DNA粗提液中加入核糖核酸酶A至终浓度0.1 mg/mL，37°C温浴30 min去除RNA，再加入氯仿：异戊醇体积比为24：1的氯仿-异戊醇混合液抽提并重复上述的沉淀、润洗、干燥、溶解步骤后，将沉淀用100 μL去离子水溶解，即获得DNA溶液。

2.根据权利要求1所述的一种从单粒稻米胚乳中提取高质量基因组DNA的方法，其特征在于：所述的洗涤液其成分包括：100mM pH=8.0的Tris-HCl，50mM EDTA，0.35M山梨醇Sorbitol，质量比为1%的聚乙烯吡咯烷酮PVP-40。

3.根据权利要求1或2所述的一种从单粒稻米胚乳中提取高质量基因组DNA的方法，其特征在于：所述的DNA提取缓冲液其成分包括：质量比2%CTAB，100mM Tris-HCl，25mM EDTA，15M NaCl，质量比1%PVP-40，0.1mg/mL 蛋白酶K，质量比0.5%NP-40，质量比0.5% Tween-20。