[发明专利]小鼠短串联重复序列的复合扩增体系及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及鉴定小鼠多个短串联重复序列的复合扩增体系及其试剂盒，可以快速准确进行小鼠细胞STR分型进而鉴定小鼠细胞系类型。

背景技术

2009年，Nature上的一篇社论指出：在数以千计的使用细胞系的生物实验室中，许多实验室并不知道介于1/5-1/3之间的常用细胞系可能已不是原先认为的那样了。过去的25年里，大量的研究，加上美国、英国、德国和日本细胞库的经验发现：18-36％的培养物含有错误鉴定的物种或其它细胞类型。就连管理严格的美国国家癌症研究所的细胞库都出现了细胞系遭污染的现象。现在实验室研究人员唯一的办法是给细胞验明正身，使用DNA指纹图谱(STR分型技术)验证所使用的细胞是否与数据库的数据一致以鉴定身份。Nature杂志社希望这一身份鉴定工作能持续下去，将主要的无限制增殖的细胞系(癌细胞)鉴定完毕。Nature杂志将会要求投稿人为文章中的所有细胞系提供身份验证。

2010年5月ATCC SDO(Standards Development Organization)工作组在Nature review cancer杂志上发表了题为《Cell line misidentification：the beginning of the end》前瞻性报道。报道指出：细胞系作为正常或肿瘤组织的模式细胞被广泛应用于科学研究和药物开发，然而很大一部分的细胞系被错误标记或被其它个体、组织、种系来源的细胞所替代，由于科学界无法解决此类问题以致大量因使用错误鉴定的细胞系而导致误导或存在潜在错误的学术论文发表。通过近年来的努力而开发出的STR分型方法已成为对人源细胞进行鉴定的标准方法，STR分型的应用成为根除细胞错误鉴定这一问题的重要一步。

STR位点是由不同数目重复单元组成的重复DNA序列。STR分型的原理为在一单管中同时扩增多个多态性DNA片段。每一个STR位点均能被扩增且扩增产物标记上不同颜色的荧光，使得扩增产物很容易通过片段大小和颜色来区分。STR分型最先应用于亲缘鉴定、法医鉴定、以及鉴定在20年之前的大灾难中遇难的受害者。随后，STR分型用于细胞鉴定中。用STR分型来做细胞鉴定具有其它方法所不具备的优势：

1.高度丰富信息：同时分析多个STR位点，可以建立每个细胞的标准分型图谱，便于不同来源细胞进行比对。

2.灵敏度高，能够检测1ng或更低的DNA量，能够检测早期细胞污染。

3.分型快速、且结果稳定可靠，易于操作及自动化。

许多方法已被用来检测细胞系交叉污染，包括同工酶分析、核型分析、人类白细胞抗原(HLA)分型，免疫分型和DNA指纹识别。这些方法都可以鉴别出某一种细胞系，但是分辨能力各不一样。然而，这些方法在不同实验室所得到的数据却不尽相同，以致没有任何一种方法可以用来建立一个标准参考数据库。由于STR分型具有快速、鉴定的细胞系结果明确等无以伦比的优点，故STR分型的应用价值最大。

目前STR分型技术已被广泛应用于人源细胞系的鉴定，并已建立起标准的STRMarker组合，用于鉴定1000多种细胞。但对于小鼠细胞系的鉴定，由于没有成型的多重STR扩增体系和相关的产品，STR分型并未得到广泛应用。

在过去一个世纪的研究中，小鼠已经成为建立人类遗传性疾病的动物模型的最佳实验材料，小鼠细胞系已广泛应用于生命科学研究的各个领域。如在疾病研究和疫苗生产方面常用的小鼠细胞系有A9、3T3、NS-1、J774A.1、CTLL-2、SC-1等多种，是除了人类细胞外被应用数量最多的动物细胞，数量有几百种。建立小鼠细胞系的STR分型方法，对于每一位使用小鼠细胞系的研究者来说无疑是一个福音，也必将极大地促进人类健康事业的发展。

发明内容

针对上述领域中的不足和需求，本发明提供一种鉴定小鼠细胞系的复合扩增体系，其扩增的位点是一些可以用来鉴定小鼠细胞系的STR位点，在鉴定小鼠细胞系时，其分型快速、结果准确、操作简单、便于大规模推广，这种方法随着试剂盒开发成功可以批量生产，使用条件可以模式化，全部过程都有自动化设备，不再依赖于人的操作经验，可以实现自动化，所需时间短，整个检测时间需要6小时左右。

小鼠短串联重复序列的复合扩增体系，所述扩增体系中同时扩增STR位点D2Mit395.1、D4Mit170.1、D5Mit201.1、D7Mit40、D11Mit4、D15Mit16和D17Mit51.1。

所述扩增体系中还包括性别决定位点Jarid1。