[发明专利]一种基于双酶偶联高通量检测微生物生产乙醇和C3-C6正烷醇的新方法无效
| 申请号： | 201110432916.0 | 申请日： | 2011-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN103146803A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 王钦宏;齐显尼;涂然;孙琳;姜丹 | 申请（专利权）人： | 天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/30 | 分类号： | C12Q1/30;C12Q1/26 |
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| 地址： | 300308 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 双酶偶联高 通量 检测 微生物 生产 乙醇 c3 c6 正烷醇 新方法 | ||
1.一种利用醇氧化酶和过氧化酶偶联反应的检测微生物生产乙醇和C3-C6正烷醇的高通量检测新方法，步骤如下：
(1)将培养基富集菌群经稀释后涂布到固体培养基中，待单菌落长出后接种到96深孔培养板中培养；
(2)将96深孔培养板利用冷冻离心机在合适的条件下离心，取其上清液进行测定；
(3)利用双酶偶联的方法，在96孔酶标板中结合Buffer I和Buffer II测定上述上清液中醇含量。
2.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的96深孔培养板是体积为3mL，但是每孔中加入0.5-2.5mL的培养基。
3.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的冷冻离心机是能够直接离心96深孔培养板。
4.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的离心条件为4℃，4000rpm离心10-60min。
5.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的上清液中不能含有菌体。
6.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的双酶是醇氧化酶和过氧化氢酶。
7.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的Buffer I中各物质含量为：苯酚：1-10mmol/ml，EDTA：25-150mg/L，磷酸盐缓冲液：pH7.5，0.05-0.5mol/L。
8.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的Buffer II中各物质含量为：醇氧化酶：500-6000U/L，过氧化氢酶：100-1000U/L，4-安替比林：1-5mmol/L，磷酸盐缓冲液0.05-0.5mol/L，pH＝7.5。
9.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的96孔酶标板需要放置冰上，待Buffer I和Buffer II及样品加入到其中后在30℃下反应5-60min。
10.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的测定波长为500nm。
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