[发明专利]一种抗小鹅瘟蛋黄抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种抗小鹅瘟蛋黄抗体，其特征在于，所述抗小鹅瘟蛋黄抗体为异源抗小鹅瘟脱脂蛋黄抗体浓缩提取液的冻干制剂。

2.一种根据权利要求1所述的抗小鹅瘟蛋黄抗体的制备方法，包括：

步骤A，将小鹅瘟病毒HN株接种到制备抗原用材料进行孵育，并将孵育后的鹅胚冷却，将所收获的鹅胚尿囊液经透析浓缩制得无污染小鹅瘟种毒液；

步骤B，向由无污染小鹅瘟种毒液经分离纯化及灭活获得的纯化灭活的无污染小鹅瘟种毒液中加入油溶性表面活性剂，完全溶解后制成水相；将白油/油溶性表面活性剂混合物与硬脂酸铝混合、灭菌后制成油相；将水相与油相混合乳化，加入硫柳汞，制成小鹅瘟灭活油乳剂免疫原；

步骤C，用小鹅瘟灭活油乳剂免疫原免疫非免疫产蛋鸡，收集高免蛋；

步骤D，从收集高免蛋中收集蛋黄液、并进行灭菌及灭活处理制得灭菌灭活高免蛋黄液；

步骤E，从灭菌灭活高免蛋黄液中提取蛋黄抗体，经灭活，过滤除菌，超滤除病毒以及超滤浓缩，制得脱脂蛋黄抗体浓缩提取液；

步骤F，冷冻干燥脱脂蛋黄抗体浓缩提取液/冻干保护剂混合物，制备固态脱脂蛋黄抗体；

其特征在于：步骤F冷冻干燥脱脂蛋黄抗体浓缩提取液/冻干保护剂混合物的程序包括将装有脱脂蛋黄抗体浓缩提取液/冻干保护剂混合物的西林瓶放入冻干箱；将温度降低到-40℃；在-40℃保持4h；以1.0℃/h的速度升温18～20h；以4～6℃/h的速度升温至25℃，干燥，制得固态脱脂蛋黄抗体。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤F中所述冻干保护剂包括甘露醇和海藻糖，其中甘露醇的含量为2wt％～5wt％，海藻糖的含量为1wt％～4wt％。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述冻干保护剂中甘露醇的含量为2wt％～3wt％，海藻糖的含量为1wt％～2wt％。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤C中用小鹅瘟灭活油乳剂免疫原免疫非免疫产蛋鸡的程序包括，首次免疫前整体免疫力的提高，首次免疫、二次免疫、三次免疫以及四次免疫，其中，整体免疫力的提高是每日用黄芪多糖供非免疫产蛋鸡饮用；首次免疫是用小鹅瘟灭活油乳剂免疫原肌肉注射非免疫产蛋鸡；二～四次免疫是用步骤C制成的小鹅瘟灭活油乳剂免疫原肌肉注射已接受前次免疫的产蛋鸡。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤E所述提取蛋黄抗体的过程包括酸化蒸馏水法提取蛋黄抗体，以及辛酸法提取蛋黄抗体。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述酸化蒸馏水法提取蛋黄抗体包括以酸化蒸馏水为提取剂从高免蛋黄液中提取蛋黄抗体，离心处理，制得粗脱脂蛋黄抗体酸化蒸馏水提取液，其中，提取过程的反应温度为2～8℃，反应时间为2～6h。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述酸化蒸馏水为pH值为4.1～4.3的灭菌蒸馏水，其用量为相当于高免蛋黄液6倍体积。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述辛酸法提取蛋黄抗体包括以辛酸为提取剂从粗脱脂蛋黄抗体酸化蒸馏水提取液中提取蛋黄抗体，过滤，制得脱脂蛋黄抗体辛酸提取液，其中，提取过程的反应温度为室温，反应时间为4～6h。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：其特征在于：所述辛酸至少为化学纯试剂或分析纯试剂，其用量为0.1v％～0.3v％。