[发明专利]一种农药降解酶制剂

说明书

技术领域

本发明涉及稳定酶制剂活性的技术领域，具体地说是一种农药降解酶制剂。

背景技术

农药污染所导致的环境安全及食品安全问题是农业生产和人类健康面临的重大问题。在我国，由于农药使用的不规范，农产品及环境都遭受到了严重的农药污染。农药污染所导致的环境安全及食品安全等问题越来越受到关注，正成为政府和广大消费者关注的焦点之一。

相关报导显示我国农产品的农药残留严重，居民日常膳食中的各类农药摄入量，高于美国、日本和欧盟等发达国家数十倍。残留农药可以改变人体荷尔蒙，使女性内分泌紊乱，男性少精，精子成活率低；残留农药进入人体，一部分通过肾肝转化或排出，增加机体工作量引起病变；一部分和血液的血红蛋白结合，降低其供氧能力。世界卫生组织公布的调查报告表明，残留农药在人体内长期蓄积滞留会引发慢性中毒，以致诱发许多慢性病症。如心脑血管病、糖尿病、癌症等，农药残留甚至通过胚胎和乳汁转移给下一代，并能够导致“三致”：致癌、致畸、致突变，有时直接导致食用者死亡。环境激素是全世界公认的造成生物异常生长发育的主要凶手。在国际组织确定的70种环境激素中，农药就有40种。由于农药的使用，蔬菜瓜果等农产品经过清洗后的水流入土壤之中，农药污染物仍未被最终降解，又可能通过其它途径进入人体。

农药降解酶通过酶促反应原理水解磷酸酯键，降解农药残留，是目前解决农药残留问题的最有效技术手段，具有安全、高效、无二次污染等特点。农药降解酶制剂的稳定性问题是其研制过程中的关键问题。酶是一种生物活性物质，受温度、pH值影响较大，如果配方体系不佳，酶很容易失去活性。所以，研制稳定的农药降解酶制剂配方，是农药降解酶发挥作用的关键。

发明内容

本发明的目的在于提供一种农药降解酶制剂。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种农药降解酶制剂，农药降解酶制剂由农药降解酶剂、稳定剂、表面活性剂、保护剂和水组成，其按体积百分比计，10％-20％的农药降解酶剂、0.1％-0.2％的稳定剂、1％-5％的表面活性剂、30％-80％的保护剂余量为水。

所述农药降解酶剂为在LB培养基中培养后的保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.1529的基因工程菌株发酵培养破碎。

所述农药降解酶剂为将基因工程菌在含氨苄青霉素的LB液体培养基中37℃，溶氧量20-30％，培养10-15小时，而后按体积比1％-5％的接种量将培养液接种于含氨苄青霉素的发酵培养基，在37℃，溶氧量20-30％，培养2-4小时后向发酵培养培养基中加入终浓度为25mmol/L的乳糖后，将培养温度降到22℃-25℃，诱导表达15-22个小时，将上述所得发酵液以5000rpm离心10分钟收集菌体，并加入1/10-1/20发酵液体积的0.1mol/LpH 7.0的磷酸盐缓冲液回溶菌体，5000rpm离心10分钟重新收集菌体，将收集的菌体平铺于铁制或钢制容器中，菌体厚度0.1-0.2cm，向容器中加入液氮破碎菌体，加入液氮的高度高于菌体表面0.5-1cm，待液氮挥发干净后将菌体真空冷冻干燥，将冻干后的菌体用0.1mol/L pH 7.0的磷酸盐缓冲液回溶至原发酵液体积，10000-12000Rpm离心10-20分钟收集上清液，即为农药降解酶剂。

所述稳定剂为聚六亚甲基胍；表面活性剂为椰油酰胺丙基甜菜碱；保护剂为甘油。所述发酵培养为按重量百分比计，蛋白胨2％-3％、酵母粉2％-3％、甘油2％-3％、K₂HPO₄ 0.25％、KH₂PO₄ 0.016％、NaCl 0.05％、MgSO₄·H₂O 0.025％，余量为蒸馏水，121℃灭菌20分钟；含氨苄青霉素的发酵培养基为每毫升发酵培养基中添加50-75μg的氨苄青霉素。所述LB液体培养基为按重量百分比计，胰蛋白胨1％、酵母粉0.5％、氯化钠1％，余量为蒸馏水，121℃灭菌20分钟；含氨苄青霉素的LB液体培养基为每毫升LB液体培养基中添加50-75μg的氨苄青霉素。所述回溶菌体离心收集菌体，将收集的菌体平铺于铁制或钢制容器中，菌体厚度0.1-0.2cm，向容器中加入液氮破碎菌体，加入液氮的高度高于菌体表面0.5-1cm，待液氮挥发干净后将菌体真空冷冻干燥，其真空度30pa，冻干温度-50℃，冻干时间8-12h。所述农药降解酶制剂用于降解有机磷农药的残留。

本发明所具有的优点：