[发明专利]HCV基因

说明书

本申请是原案申请日为2008年4月28日、原案申请号为200880013943.0(国际申请号为PCT/JP2008/058215)、发明名称为“HCV基因”的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及丙型肝炎病毒(以下有时称作“HCV”)基因、来自该基因的复制子RNA、导入了复制子RNA的复制子复制细胞、以及使用了该复制子复制细胞的药物的筛选方法。

背景技术

HCV是丙型慢性肝炎的致病因子，根据WHO的统计，推测全球有1.7亿感染者。HCV是分类为黄病毒科、黄病毒属的病毒，认为其经由血液或血液成分而感染，在肝脏中增殖。虽然HCV感染者在感染初期仅出现较轻微的症状，但往往会转为慢性，经过一定期间的无症候性期后，发展为慢性肝炎。而且，随着长期感染，病情向肝硬化发展，往往会发展为肝癌。认为肝癌中有95％与肝炎病毒有关，而其中的80％是由HCV感染引起的。

在丙型慢性肝炎的治疗中广泛使用干扰素。近年来，通过改良干扰素的剂型、以及改善干扰素与利巴韦林联用疗法等给药方法，HCV从体内被驱除、治愈的比例也逐渐增加。但通过给予干扰素而得到的治愈率才50％左右，认为存在多种对干扰素治疗显示出抵抗性的HCV。因此，人们希望开发对干扰素抵抗性病毒具有治疗效果的药物。

在上述药物的开发中，药物的筛选系统是必需的。虽然有人报道了使HCV在试管内感染来自人或猴的细胞并使其增殖，但上述增殖系统的感染效率、增殖效率均低，无法用作药物的筛选系统。

最近，脇田等人从丙型重症肝炎患者体内分离出基因型2a的HCV基因(专利文献1)。在试管内(体外)由上述分离的JFH1株合成全长RNA，并导入来自人肝癌的细胞(Huh7细胞)中时，可以得到在细胞内自主复制的复制子RNA。并且，确认感染性微粒被排放到导入有复制子RNA的细胞的培养上清中(非专利文献1)。因此，通过将JFH1株的复制子RNA导入来自人肝癌的细胞(Huh7细胞)中，并将得到的感染性微粒再次与来自人肝癌的细胞进行培养，可以建立再感染增殖系统。通过使用该再感染增殖系统，开始了抗HCV药物的筛选。

但是，JFH1株为基因型2a的HCV，是干扰素感受性的HCV。因此，不具有对干扰素显示出抵抗性的HCV基因区，也无法特定在规定干扰素抵抗性的区域发挥作用的宿主侧的因子。因此，有可能无法筛选对干扰素抵抗性的HCV有效的药物。

最近，Lemon等人报道了将基因型1a的H77株的复制子RNA导入来自人肝癌的细胞(Huh7细胞)中的感染增殖系统(非专利文献2)。但是，虽然使由导入了该复制子RNA的细胞的培养上清得到的病毒颗粒再次感染来自人肝癌的细胞，但与上述JFH1株的感染性颗粒相比，感染效价低约400倍，由此认为H77株的复制子RNA释放了失去感染性的病毒颗粒。因此认为：可在试管内复制的H77株的RNA复制子失去了产生感染性颗粒的功能，并未保持本来的HCV的增殖功能。

因此，使用了该H77的复制子RNA的感染增殖系统的筛选系统有可能无法筛选对在机体内具有增殖功能的HCV有效的药物。

如上所述，由于HCV不存在高效率的试管内培养系统，所以难以进行对HCV治疗有用的药物的筛选。例如，对于目前广泛用于HCV治疗的干扰素，是以患者为受试体开发和改良了直接疗法，对患者造成很大的负担。上述脇田和Lemon所报道的复制子RNA虽然可以筛选一部分药物，但这些复制子RNA存在上述问题，认为其无法筛选可广泛用于HCV治疗的药物。

专利文献1：日本特开2002-171978号公报

非专利文献1：Nature Medicine，(美国)2005年，第11卷，第791～796页

非专利文献2：Proceeding of the National Academy of Science of the United State of America，2006年，第103卷，第2310～2315页

发明内容

发明所要解决的课题