[发明专利]一种运用ELISA测定蛋白质浓度的方法有效
| 申请号： | 201110427199.2 | 申请日： | 2011-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN102520191A | 公开（公告）日： | 2012-06-27 |
| 发明（设计）人： | 袁琳;姜雯雯;陈红 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/543 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 常亮;李辰 |
| 地址： | 215123 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 运用 elisa 测定 蛋白质 浓度 方法 | ||
1.一种运用ELISA测定蛋白质浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：
取待测蛋白质的抗体经第一稀释后获得第一抗体；
取酶标记抗体经第二稀释后获得第二抗体；
取所述第一抗体与所述第二抗体混合获得混合抗体，所述第一抗体与所述第二抗体的摩尔浓度之比为1∶0.0625～1∶2；
取待测蛋白质的标准品获得系列浓度的标准溶液，取所述标准溶液包被基板，第一孵育、洗板、封闭后，加入所述混合抗体，第二孵育后加入所述酶的底物显色，终止反应后，测得吸光度值，获得标准曲线；
取待测蛋白质获得待测溶液，取所述待测溶液包被基板，第三孵育、洗板、封闭后，加入所述混合抗体，第四孵育后加入所述酶的底物显色，终止反应后，测得吸光度值，与所述标准曲线比较，获得所述蛋白质的浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一稀释倍数为2500～5000倍。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二稀释倍数为300～10000倍。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一抗体与所述第二抗体的体积比为1～10∶10～1。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述吸光度值在400～600nm下测定。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一孵育或第三孵育具体为于30～40℃孵育2～4h。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述封闭加入牛血清白蛋白于30～40℃孵育0.5～1.5h。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二孵育或第四孵育具体为于30～40℃孵育0.5～1.5h。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述显色具体为0～30℃显色5～30min。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测蛋白质的抗体为所述待测蛋白质的单克隆抗体。
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