[发明专利]含有柯萨奇B3病毒2B蛋白中36-83位氨基酸基序的蛋白质及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种引起肿瘤细胞发生自噬性细胞凋亡的蛋白质及其应用，特别涉及柯萨奇B3病毒2B蛋白在制备抗肿瘤药物或肿瘤治疗辅助药物中的应用，尤其是涉及柯萨奇病毒非结构蛋白2B中36-83位氨基酸基序在通过引起肿瘤细胞自噬而抑制肿瘤细胞生长中的应用，属于生物医学领域。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康以及生命的重要疾病，目前肿瘤的主要治疗手段是手术、放射治疗和化学治疗等，这些方法虽然取得一定的成效，但是还无法彻底根治肿瘤，且均存在一定副作用，例如化学治疗所造成的骨髓抑制、食欲减低、腹泻，放射治疗所引起的吞咽困难等。不仅如此，这些传统的治疗除具有副作用外，还有一些治疗的盲点，例如抗药性的产生等。随着现代分子生物学及其技术的发展，肿瘤的治疗更加多样化，出现了一些新的治疗或辅助治疗的方法，这其中就包括利用病毒制备抗肿瘤药物。2010年，中国国家知识产权局公开了一种植物病毒在制备恶性肿瘤的药物中的应用(CN101653462A)，其利用一种植物病毒(烟草花叶病毒)转染至恶性肿瘤细胞(HeLa细胞)中，在肿瘤细胞内发生复制并且诱导肿瘤细胞发生自噬与凋亡性死亡。某些病毒也可通过破坏肿瘤细胞的生长治疗肿瘤，柯萨奇病毒A组21型可作为潜在的抗多形性骨髓瘤的治疗手段。(Au GG，Lincz LF，Enno A，Shafren DR.Oncolytic Coxsackievirus A21as a novel therapy for multiple myeloma.Br J Haematol.2007；137(2)：133-141.)

对肿瘤细胞死亡以及抗死亡特性的研究，多集中于肿瘤细胞的凋亡机制，然而，肿瘤细胞中凋亡抗性的存在已经成为肿瘤治疗的主要障碍，而自噬与肿瘤作用的研究正是解决这一问题的关键。自噬是细胞利用溶酶体降解自身大分子物质和受损的细胞器的生物学过程。自噬可通过隔离受损细胞器促进蛋白的分解代谢或增加基因组稳定性而发挥抗肿瘤作用。细胞自噬有维持细胞稳态的作用，也影响肿瘤的发生和发展，成为肿瘤靶向治疗的潜在靶点，因此，如何在肿瘤治疗中发挥自噬的作用是当前研究的热点。目前已知一些抗肿瘤药物的作用途径与自噬有关，如他莫昔芬(tamoxifen)可诱导乳腺癌MCF-7细胞产生自噬性死亡(Bursch W，Ellinger A，KienzlH et al.Active cell death induced by the anti-estrogens tamoxifen and ICI 164 384in human mammary carcinoma cells(MCF-7)in culture：the role of autophagy.Carcinogenesis，1996，17(8)：1595-1607.)；长春新碱(vincristine)可以诱导肝癌细胞HepG2的自噬性凋亡，但直接发挥诱导自噬作用而抑制肿瘤的药物却很少。

在某些病毒性疾病中，也发现了自噬作用的发生，脊髓灰质炎病毒(polio virus)2BC蛋白通过促进表达微管相关蛋白1的轻链3(LC3)，从而促进293T细胞的自噬发生(Jackson WT，Giddings TH Jr，Taylor MP，Mulinyawe S，Rabinovitch M，Kopito RR，Kirkegaard K.Subversion of cellular autophagosomal machinery by RNA viruses.PLoS Biol.2005，3(5)：861-871.)；人类单纯疱疹病毒(HSV)通过激活蛋白激酶R(PKR)从而促进自噬小体的形成(Talloczy Z，Virgin HW 4th.Levine B.PKR-dependent autophagic degradation of herpes simplex virus type 1.Autophagy.2006，2(1)：24-29.)。柯萨奇病毒B组3型(CVB3)可以引起HeLa细胞发生自噬(Wong J，Zhang J，Si X，Gao G，Mao I，McManus BM，Luo H.Autophagosome supports coxsackievirus B3replication in host cells.J Virol.2008；82(18)：9143-9153.)。但目前还没有通过病毒蛋白的真核表达载体，直接促进细胞自噬作用，从而抑制肿瘤的研究。

发明内容