[发明专利]抗微管化疗药物基因TUBB3 mRNA表达量快速检测试剂盒

权利要求书

1.用于TUBB3基因mRNA定量检测的引物，其序列如下：

TUBB3基因上游引物序列为：5’- GAGCGGATCAGCGTCTACTACA -3’； 

TUBB3基因下游引物序列为：5’- GGCTCGAGGCACGTACTTG-3’  。

2.与权利要求1所述引物配合使用的荧光探针，其序列为5’- CGAGGCCTCTTCTC -3’，其一端具有报告荧光基团，另一端具有淬灭荧光基团。

3.一种用于TUBB3基因mRNA定量检测的试剂盒，其包括权利要求1所述的引物和权利要求2所述的探针。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，其还包括内参引物和相应荧光探针。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述内参引物和探针为：

GAPDH基因上游引物序列为：5’- ATGGAAATCCCATCACCATCTT -3’ ；

GAPDH基因下游引物序列为：5’- CGCCCCACTTGATTTTGG -3’ ；

GAPDH 基因荧光探针：6FAM 5’- CAGGAGCGAGATCC -3’TAMRA。

6.根据权利要求3~5任一项所述的试剂盒，其还包括选自以下试剂中的一种或多种：第一链cDNA合成试剂、阴性对照、阳性对照、PCR反应液、RNA提取试剂。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：第一链cDNA合成试剂为：4μl 25 mmol/L MgC1₂，2μl 10×逆转录酶缓冲液，2μl 10 mmol/L dNTP，0.5 μl RNA酶抑制剂，0.5 μg Oligo(dT)₁₅，2U AMV逆转录酶，12μl无RNase去离子水。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，其中阴性对照和阳性对照：以去离子水为阴性对照，以含有TUBB3总RNA样品为阳性对照。

9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，其中的PCR反应液包括：10×PCR 缓冲液、2.5~4.0mM的MgCl₂、2U/μl的Taq酶、0.2~0.4mM的dNTPs、1U/μl的UNG酶、0.3~0.6mM dUTP，所述引物及探针溶于PCR反应液中，浓度为引物0.25pmol/μl，荧光探针0.3pmol/μl。