[发明专利]一种23-乙酰泽泻醇B单体的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物化合物单体的制备方法，具体涉及从泽泻中提取分离23-乙酰泽泻醇B单体的方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。

背景技术

23-乙酰泽泻醇B又叫泽泻醇B单乙酸酯，23-O-Acetylalisol B，Alisol B 23-acetate，Alisol B 23-monoacetate，Alisol B monoacetate，分子式为C₃₂H₅₀O₅，分子量为514.74，结构式如下：

 23-乙酰泽泻醇B来源于泽泻科泽泻属植物泽泻Alisma orientalis (Sam.) Juzep的干燥块茎，是泽泻药材中的主要活性成分，具有抗高血脂、抗肝毒、抑制血管收缩功能。通过研究23-乙酰泽泻醇B逆转因P-糖蛋白在肿瘤细胞上过度表达产生的多药耐药性的活性，发现对23-乙酰泽泻醇B能够恢复多药耐药细胞株对抗癌素的敏感性，是一种潜在的MDR 逆转剂，可用于研制新型抗肿瘤药物。目前文献报道主要集中在提取方法、检测方法及药理研究上。

发明内容

本发明的目的就在于提供一种简便的快速分离制备高含量23-乙酰泽泻醇B的方法，为新药研发提供支持。该方法操作简便，分离效率高，工艺稳定，成本低廉，可实现大量23-乙酰泽泻醇B单体的高纯度分离制备，得到的23-乙酰泽泻醇B单体纯度高，可达到99%以上。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种23-乙酰泽泻醇B单体的分离纯化方法，其特征在于：以泽泻科植物泽泻的块茎为原料，通过提取、萃取、富集和结晶得到23-乙酰泽泻醇B单体，具体包括下述主要步骤：

A、提取

将干燥的泽泻块茎粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度均为75%～95%的甲醇或乙醇溶液，其加入量按照药材重量:乙醇溶液体积=1Kg:(5～10)L计算，60～80℃提取3～4次，每次1～2小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得浓浸膏待进行下一步水解处理；

B、萃取

将步骤A所得的浓浸膏加水稀释至相对密度为0.8～0.9g/mL（60℃），然后加入等体积的乙酸乙酯萃取3～5次，分取上层溶液，45～60℃减压浓缩至干，所得固体物进行下一步富集处理；

C、富集

将步骤B所得固体物用甲醇或乙醇溶解完全，加入固体物3～5倍质量的硅胶拌样，经40～60℃干燥后，进行以二氯甲烷-甲醇混合液为洗脱剂的硅胶柱层析，其中硅胶为200～300目，其用量为固体物质量的20～50倍，流出液按200ml/瓶收集，进行以环己烷-乙酸乙酯1:1体积比为展开剂，5%质量体积比硅钨酸乙醇溶液为显色剂的TLC操作，完全收集经105℃加热后显示为紫红色斑点的流份，并于40～60℃的水浴减压干燥，得粉末状固体，进行进一步纯化；

所述拌样硅胶的类型优选60～80目或80～100目。

所述洗脱剂中甲醇的体积分数为5%～15%。

D、结晶

按照粉末状固体物:乙酸乙酯溶液=1g:( 6～8)ml计算，于步骤C得到的粉末状固体物中加入乙酸乙酯溶液，加热使溶解完全，过滤除去不溶性杂质，将滤液冷却结晶；根据晶体纯度情况，重结晶2～3次，直到纯度≥99%，即可得到23-乙酰泽泻醇B单体产品。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明通过萃取使23-乙酰泽泻醇B 从提取浓缩水溶液中转移至乙酸乙酯溶液中，起到提高目标物浓度的作用，同时由于乙酸乙酯易于浓缩，从而起到减少能耗的作用。经硅胶富集后通过结晶处理用最适宜的工艺及参数条件，使产品中23-乙酰泽泻醇B的含量达到99%以上；整个工艺过程操作简便、工艺稳定、成本低廉，适合工业化生产，且分离效率高、产品纯度高，即可实现大量23-乙酰泽泻醇B单体的高纯度分离制备。 

附图说明

图1是本发明实施例1所得23-乙酰泽泻醇B单体产品的HPLC图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。

但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。

下述各实施例中，终产品23-乙酰泽泻醇B单体的纯度复检均采用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）法，色谱条件如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水（73:27）为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/min；检测波长为208 nm。