[发明专利]一种栎瘿酸单体的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物化合物单体的制备方法，具体涉及从秦艽中提取分离栎瘿酸单体的方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。

背景技术

秦艽是龙胆科多年生草本植物，是治风湿关节痛、结核病潮热、黄疸等症的主药之一。在青海尤以黄南产的秦艽质量最佳，是中国重要的传统中药之一，始载于《神农本草经》，列为中品，“秦艽主寒热邪气，寒湿风痹，肢节痛、下水、利小便。”

栎瘿酸是秦艽中特征性化学成分之一，英文名称：Roburic acid; 3,4-Secoursa-4(23),12-dien-3-oic acid。化学名称为：1-Chrysenepropanoic acid1,2,3,4,4a,4b,5,6,6a,7,8,9,10,10a,12,12a-hexadecahydro-1,4a,4b,6a,9,10-hexamethyl-2-(1-methylethenyl)-,(1S,2S,4aR,4bS,6aR,9R,10S,10aR,12aR)，分子量为440.70,其结构式为：

由于栎瘿酸是秦艽的特征性化学成分之一，因此以栎瘿酸作为该药材及其相关制剂的质量评价指标，既能较真实地反映其质量又具有专属性，可对秦艽药材及其制剂的质量控制起到重要作用。

但是，通过检索大量文献发现，目前只有关于秦艽中苦苷类的提取分离纯化报道，未见与栎瘿酸单体分离工艺的相关专利报道。究其原因，与栎瘿酸的性质和其它含量较高的苦苷和糖类成分干扰有关，本发明优化了针对栎瘿酸成分提取分离后的一系列方法，从中得到含量较高的单体栎瘿酸成分。

发明内容

本发明的目的在于提供一种栎瘿酸单体的分离纯化方法。该方法操作简便，分离效率高，工艺稳定，成本低廉，可实现栎瘿酸单体的高纯度分离制备，得到的栎瘿酸单体纯度高，可作为鉴别对照品使用。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种栎瘿酸的分离纯化方法，其特征在于：以秦艽为原料通过提取、萃取、柱分离和结晶得到栎瘿酸单体，具体包括下述主要步骤：

A、提取：

将干燥的秦艽粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液，其加入量按照药材重量:乙醇溶液体积=Kg:(8～10)L计算，回流提取3次，每次2～3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得浓浸膏待进行下一步萃取处理；

B、萃取：

将步骤A所得的浓浸膏加入1倍量80℃的水，稀释后的浸膏水溶液再加入1倍量的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取后乙酸乙酯层，用真空旋蒸55℃浓缩至流浸膏，加入5倍重量的60～80目硅胶拌样，55℃干燥，所得干燥后的拌样硅胶备硅胶柱分离；

C、硅胶柱分离：

根据步骤B所得拌样硅胶重量，称取10倍量柱硅胶用二氯甲烷装入备好的玻璃层析柱中，用二氯甲烷作为洗脱剂洗脱沉降，直至流速恒定；将步骤B中干燥后的拌样硅胶，按照柱硅胶：拌样硅胶10:1装入层析柱中，用二氯甲烷洗脱，根据TLC检测收集栎瘿酸产品段，回收二氯甲烷，得白色固体，待下一步结晶；

D、结晶：

按照白色固体:氯仿（1g:20ml）计算，将步骤C得到的白色固体用氯仿溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，得到氯仿滤液体积，加入2倍体积的甲醇冷藏结晶，根据晶体具体纯度，重复结晶2～3次，直至纯度≥98.5%，即可得到栎瘿酸单体产品。

步骤B所述柱硅胶为200～300目。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明方法是将栎瘿酸从秦艽浓乙醇提取液中分离出来，经浓缩萃取，再分离纯化而得；由于减少了较大极性物质的提取，可大大简化工艺、缩短生产周期、降低生产成本；而通过萃取、硅胶柱分离、结晶过程，通过最适宜的工艺及参数条件，使产品中栎瘿酸的含量达到98%以上；整个工艺过程操作简便、工艺稳定、成本低廉，且分离效率高、产品纯度高，即可实现栎瘿酸单体的高纯度分离制备。

附图说明

图1是本发明实施例1所得栎瘿酸单体产品的HPLC图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。

但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。

下述各实施例中，终产品栎瘿酸单体的纯度复检均采用反相分析型液相色谱（HPLC-ELSD）法，色谱条件如下：