[发明专利]一种乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药化学对照品的制备方法，属中药现代化技术领域，具体而言，本发明涉及一种从中药材筋骨草中快速分离乙酰哈巴苷对照品的方法。

背景技术

筋骨草（Ajugae Herba），为唇形科（Labiatae）筋骨草属（Ajuga L.）植物筋骨草（Ajuga decumbens Thunb.）的干燥全草，又名金疮小草、青鱼胆草、苦地胆草、散血草。性味苦，寒，归肺经。具有清热解毒，凉血消肿的功效。用于咽喉肿痛，肺热咯血，跌打肿痛。为《中国药典》2010年版新增收载品种。

乙酰哈巴苷（8-O-Acetylharpagide），分子式为C₁₇H₂₆O₁₁，结构式如下：

筋骨草的主要活性成分为环烯醚萜苷类化合物，而乙酰哈巴苷是筋骨草中含量最高的环烯醚萜苷类物质，因此《中国药典》2010年版选择乙酰哈巴苷作为筋骨草的鉴别和含量测定用对照品，用以控制筋骨草的药材质量。

乙酰哈巴苷的水溶性很强，不易常规层析分离和结晶纯化，因而很难获得其高纯度单体。经过研究实践，发现采用制备型高效液相色谱柱分离，经过一次制备，产品纯度能够达到99%以上，完全能够满足中药化学对照品的要求。目前国内关于乙酰哈巴苷分离纯化的文献报道很少，高效制备液相色谱用于乙酰哈巴苷对照品的分离纯化属首次。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的缺陷，提供一种从筋骨草药材中分离乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法。该方法简便易行、消耗溶剂少、得率高，安全无毒、环保，适于工业化生产。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：

A. 原料提取：将筋骨草药材粉碎成粗粉，按照质量体积比（kg/L）加入8-10倍量的体积分数为40-60%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，合并提取液，冷却至室温；

B. 大孔树脂富集：将步骤A冷却后的提取液以2~5BV的速度通过活化好的大孔吸附树脂柱进行吸附，然后分别用2~4倍量柱体积的水和1~3倍量柱体积的体积分数为40%的乙醇溶液洗脱杂质，再用1~3倍量柱体积的体积分数为60%乙醇溶液洗脱目标物质，收集洗脱液，浓缩至原体积的1/10；

C. 高效制备液相分离：将步骤B所得浓缩溶液用微孔滤膜过滤后，上高效制备液相色谱柱分离，在线监测，针对性收集目标化合物色谱峰段制备溶液；

所述高效制备液相色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶（C18），柱规格为50cm×10cm、50cm×8cm或50cm×5cm等。

所述高效制备液相的色谱条件为：流动相为体积分数20-30%的甲醇溶液，检测波长210nm。

D. 产品回收：将步骤C所得制备溶液减压回收甲醇，水溶液以2-5BV的速度通过活化好的大孔吸附树脂柱进行富集，然后用1-3倍量柱体积的体积分数95%乙醇洗脱，浓缩洗脱液至干，固体于50～70℃温度下干燥6～8小时，得乙酰哈巴苷对照品。

所述大孔吸附树脂选自D101或AB-8型。

本发明的优点在于：

1、步骤少，耗时短，得率高，操作简便，易于工业化生产。

2、溶剂消耗少，制备液相色谱分离步骤中的溶剂都可回收再利用。

3、溶剂毒性小，所用的有机溶剂甲醇、乙醇等，环境污染小。

4、具有较高的学术价值。目前国内关于乙酰哈巴苷分离纯化的文献报道很少，高效制备液相色谱用于乙酰哈巴苷对照品的分离纯化属首次。

附图说明

图1为本发明实施例1 C步骤所述高效制备液相分离在线监测图谱

图2为本发明实施例1所得乙酰哈巴苷产品的HPLC检测图谱 。

具体实施方式

实施例1

一种乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：

A. 原料提取：将筋骨草药材2kg粉碎成粗粉，加入20L体积分数为40%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，合并提取液，冷却至室温；