[发明专利]凝血酶直接抑制剂多肽水合盐及合成方法

说明书

本申请是分案申请，其母案是申请日为2008年02月13日、申请号为CN200810008131.9、发明名称为“凝血酶直接抑制剂多肽水合盐及合成方法”的申请。

技术领域

本发明涉及药品领域，是凝血酶直接抑制剂的多肽水合盐及合成方法。

背景技术

凝血酶直接抑制剂的多肽部分已有相关的报道(美国专利号为5433940)，但对其水合盐类并没有提及。在实际合成过程中，如果产物最后的精制过程是以水合盐的形式存在，由于多肽水合盐易溶于水，且比较稳定，尤其是盐酸、醋酸盐和三氟醋酸盐在临床应用过程中，没有毒副作用，是多肽产物最佳存在形式，因此对该化合物水合盐类的研究是必要的。

相关类型化合物的合成方法国外有文献报道是利用叔丁氧羰基(t-Boc)氨基酸保护策略的固相合成方法(MaraganoreJM.，1989)，该方法的缺点是所使用的裂解剂是HF，由于它的强挥发性，对人体有强腐蚀性，对环境的破坏也很大，而且在化合物中引进了氟化物，在临床应用中需严格控制氟的含量，因此后处理很困难，加大了合成成本。

发明内容

本发明的一个目的是为解决上述现有技术中没有凝血酶直接抑制剂多肽水合盐、相关类型化合物合成方法处理困难、污染和毒性比较大的问题，提供一种可用于临床的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐，以及一种简单、方便且对环境没有污染的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐的合成方法。

为实现上述目的，本发明的一个技术方案提供了一种凝血酶直接抑制剂多肽水合盐：H-D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH，其多肽水合盐的通式为C₉₈H₁₃₈N₂₄O₃₃·mX·nH₂O。

X为醋酸、盐酸或三氟醋酸。

m的取值范围为1≤m≤4。

n的取值范围为2≤n≤12。

m的优选取值范围为2≤m≤3

n的优选取值范围为4≤n≤8。

本发明的另一个技术方案提供了一种凝血酶直接抑制剂多肽水合盐的合成方法，该方法为Fmoc保护氨基酸的多肽固相合成方法；合成过程包括单个氨基酸偶联和多肽片段偶联。

合成方法以单个氨基酸偶联或多肽片段的形式偶联：

1)根据Fmoc多肽固相合成方法合成多肽片段；

2)将这些不同片段偶联；

3)重复上述4、5和6步骤，直至得到产品。

合成方法为下述步骤：

1、C端第1个氨基酸Fmoc-Leu-Wang树脂的脱保护；

2、C端第2个氨基酸与Leu-Wang树脂的偶联；

3、C端第3-20个氨基酸的偶联；

4、最终产物20肽Fmoc保护的脱除；

5、脱除肽的侧链保护及肽从树脂上的裂解；

6、粗品的纯化；

原料选自合成所需的11种氨基酸：D-苯丙氨酸(D-Phe)、脯氨酸(Pro)、精氨酸(Arg)、甘氨酸(Gly)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酸(Glu)、异亮氨酸(Ile)、酪氨酸(Tyr)和亮氨酸(Leu)。

氨基酸的氨基端为没有保护和芴甲氧羰基(Fmoc)保护；氨基酸的羧基端为没有保护、苄酯(OBzl)保护、甲酯(OMe)保护或乙酯(OEt)保护中的任意一种或多种。

脱氨基保护的试剂为1-50％的哌啶/溶剂(体积比)，优选体积比15-25％的哌啶/溶剂；溶剂为N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)；最终产物从树脂上裂解的裂解剂为95％三氟醋酸(TFA)：2.5％Y：2.5％H₂O。

所述Y为三异丙基硅烷(TIS)、苯甲醚(Anisol)、苯甲硫醚；合成反应的活化剂为N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N’-二异丙基碳二酰亚胺(DIC)、苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、7-氮杂苯并唑-1-基-氧-(三-(二甲胺基)膦)六氟磷酸盐(BOP)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷酸盐(PyPOP)中任意一种或多种，或者，上述活化剂中的一种或一种以上的物质和HOBt同时使用。

更进一步地说合成方法为下述步骤：