[发明专利]一种肠道病毒71型病毒株及其用途、疫苗和制备方法

说明书

技术领域

本发明属于疫苗生产领域，具体而言，涉及一种肠道病毒71型(Enterovirus 71)病毒株及其用途、由该病毒株制备的疫苗及其制备方法。

背景技术

手足口病(Hand，foot and mouth disease，HFMD)是由肠道病毒感染引起的一种急性传染病，多发生于5岁以下的婴幼儿，以手、足、口腔等部位皮肤粘膜的皮疹、疱疹、溃疡为典型表现，少数患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑脊髓膜炎、脑炎等并发症。引发手足口病的肠道病毒有20多种(型)，其中以柯萨奇病毒A16型(CA16)和肠道病毒71型(以下称为EV71)最为常见，其中EV71不仅引起手足口病，而且可引起严重中枢神经系统并发症，如脑膜炎、脑炎、急性迟缓性瘫痪等。研究发现，感染重症病例中，EV71感染占90％以上。

我国于1981年上海首次报道手足口病，此后，北京、河北、天津、福建、吉林、山东、湖北、青海和广东等十几个省份均有本病报道。1983年天津发生Cox A16引起的手足口病爆发，1986年再次爆发。中国大陆首次发现EV71型感染是在1987年冬季湖北省的一次手足口病流行期间。2010年，全国共报告手足口病病例1593437例，死亡839余人。

目前尚无针对预防该病的特异性疫苗、药物等。其中，在预防该病的特异性疫苗的研制过程中，肠道病毒71型病毒疫苗属于预防人类传染病的新型疫苗，我国台湾地区以及新加坡等国家曾先后开始进行相关疫苗的研究，包括灭活疫苗、重组疫苗、多肽疫苗和减毒活疫苗等，但均停留在临床前研究阶段。目前，EV71疫苗的研究在世界范围内仍未取得突破，但血清流行病学调查资料显示，人群感染后产生的EV71中和抗体可有效预防EV71病毒的再次感染，为EV71疫苗的研发奠定了一定的免疫学基础。由于不同基因型毒株间、相同基因型不同基因亚型毒株间、甚至相同基因亚型不同毒株间抗原性和免疫原性可能存在差异，从而导致不同毒株的交叉保护水平可能存在差异，对疫苗株的选择提出了严峻的挑战；虽然EV71感染已流行多年，但近年来EV71感染多次爆发、并且导致较多的重症甚至死亡病例，其致病机制仍不清楚；这些均使EV71疫苗的研制存在一定的困难。

此外，国内外肠道病毒71型疫苗的研发还受困于稳定的动物模型，因此建立成熟稳定的动物模型显得尤为重要。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种肠道病毒71型病毒株及其用途。

具体而言，本发明提供：

(1)一种肠道病毒71型(Enterovirus 71)病毒株，所述病毒株的保藏编号为CGMCC No.5540。

(2)根据(1)所述的病毒株，其中所述病毒株的全基因序列为SEQ ID No.：1所示的序列。

(3)根据(1)所述的病毒株在制备用于预防和/或治疗手足口病的药物中的用途。

(4)根据(3)所述的用途，其中，所述药物为疫苗。

(5)一种用于预防和/或治疗手足口病的疫苗，其中，所述疫苗含有：1)经灭活的(1)或(2)所述的病毒株；以及任选的2)佐剂。

(6)根据(5)所述的疫苗，其中，以病毒蛋白含量计，所述病毒株的含量为1～4μg/ml。

(7)根据(5)所述的疫苗，其中，所述佐剂为氢氧化铝，并且所述氢氧化铝的含量为0.5～1.5μg/ml。

(8)一种根据(5)-(7)中任意一项所述的疫苗的制备方法，其包括：将(1)或(2)所述的病毒株进行培养，并进行灭活、纯化，从而制备得到所述的疫苗。

(9)根据(8)所述的制备方法，其中所述的纯化在所述灭活之前进行并且/或者在所述灭活之后进行。

(10)根据(8)所述的制备方法，其包括：

1)提供Vero细胞或人二倍体细胞；

2)在步骤1)得到的Vero细胞或人二倍体细胞中，对(1)所述的病毒株进行培养，从而得到病毒悬液；

3)将步骤2)得到的病毒悬液进行纯化并灭活，从而得到疫苗原液；以及

4)将步骤3)得到的疫苗原液进行稀释，从而得到所述的疫苗。

(11)根据(10)所述的制备方法，其中，在步骤2)中，所述的培养条件为：温度36±1℃、pH值7.0±0.5、溶解氧浓度20～80％、转速20～80rpm。