[发明专利]一种布鲁氏菌B细胞表位及其单克隆抗体和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种布鲁氏菌B细胞表位，以及使用该表位刺激得到的抗布鲁氏菌bp26蛋白单克隆抗体。本发明还涉及该细胞表位抗体及该细胞表位的应用。

背景技术

布鲁氏菌病（Brucellosis）是目前世界上流行最广的人畜共患传染病之一，近十几年来，该病的发生和流行在世界范围内呈上升趋势。据世界卫生组织统计表明，全世界每年出现50万例人布鲁氏菌病，每年造成的经济损失达30亿美元 ，我国布病的流行以羊种布氏杆菌为主的混合感染，羊种占流行株的80%。

布鲁氏菌病目前缺乏特异有效的治疗手段，大剂量抗菌素即使长期治疗收效仍有限，尤其难以克服菌株耐药问题，疫苗接种和清除感染宿主是防控的主要手段。布鲁氏菌病的免疫制剂种类繁多，主要包括弱毒活疫苗﹑死疫苗﹑亚单位疫苗﹑抗独特性疫苗和DNA疫苗等。

由于热灭活菌缺乏活性抗原刺激，不能在体内诱发可检测的IL-12，并且抑制IL-12的产生，免疫效果不佳，而且死菌诱发的多是无保护力的体液免疫应答。而亚单位疫苗虽然可起到短期的保护作用，但并不能诱发有效的长期免疫，只有活菌才能诱发细胞免疫。

我国主要是以弱毒菌苗株M5-90来免疫羊。它对成年羊有很好的免疫保护效果，但会导致妊娠羊流产。bp26蛋白与弱毒菌苗株毒力相关，并含有保护性抗原表位，若将M5-90疫苗株携带的bp26基因全部敲除，则影响弱毒菌苗株的免疫效果。另外，由于M5-90免疫的动物和野毒菌株自然感染的动物现有诊断方法不能鉴别，严重影响了布鲁氏菌病的检验和疫苗免疫预防。因此，针对bp26蛋白的抗原表位进行修饰或改造标记疫苗，可建立该表位多肽ELISA诊断方法及其诊断试剂，进而解决布鲁氏菌病鉴别诊断和基因工程标记弱毒菌苗株的技术难题。

关于bp26蛋白的表位研究，Patricia Seco-Mediavilla 等人构建了系列的截短多肽的表达质粒，并表达纯化融合蛋白对抗bp26单克隆抗体进行表位筛选，但是筛选出来的抗原表位段并不明确。(参见Epitope Mapping of the Brucella melitensis BP26 Immunogenic Protein: Usefulness for Diagnosis of Sheep Brucellosis ， Seco-Mediavilla， Verger et al. Clin. Vaccine. Immunol. 2003， 10(4):647)。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种布鲁氏菌B细胞表位。

本发明的另一个目的在于提供上述B细胞表位在制备诊断、预防或治疗布鲁氏菌病诊断试剂或药物中的应用。

本发明的又一个目的在于提供由上述细胞表位刺激产生的单克隆抗体。

本发明的再一个目的在于提供上述单克隆抗体在制备诊断、预防或治疗布鲁氏菌病诊断试剂或药物中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

布鲁氏菌B细胞表位，其序列为DRDLQTGGI( SEQ ID NO：1)。

抗布鲁氏菌bp26蛋白的单克隆抗体，其制备方法为：

1)  将上述的布鲁氏菌B细胞表位免疫动物；

2)  取经免疫的动物脾细胞与瘤细胞融合，得到可稳定分泌抗布鲁氏菌bp26蛋白的杂交瘤细胞；

3)  收集、纯化杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，即为抗布鲁氏菌bp26蛋白的单克隆抗体。

优选的，产生免疫反应的动物的血清间接ELISA效价不低于1：51200。

本发明的有益效果是：

本发明的布鲁氏菌B细胞表位，为bp26蛋白的核心表位，疫苗株中该段序列突变后获得的突变bp26蛋白在免疫羊之后，无法诱导产生抗该表位的抗体，从而达到自然感染与疫苗接种免疫的鉴别诊断。

本发明的布鲁氏菌B细胞表位，偶联之后可用于检测羊血清中的布鲁氏菌病，建立Peptide-ELISA检测方法，为新型分子标记疫苗的研制提供依据。

本发明的单克隆抗体，对bp26蛋白具有很好的特异性识别能力，可以精确地识别布鲁氏菌的表位。

本发明的单克隆抗体及B细胞表位用于布鲁氏菌病的诊断，可以很好地鉴别出动物是自然感染布病的还是接种免疫的。

附图说明

图1 是重组蛋白bp26表达与纯化电泳鉴定图；

图2 是Western-Blot 试验检测单克隆抗体bp26-3H5与布鲁氏菌疫苗株M5-90中提取的天然膜蛋白的反应性结果；

图3 是肽矩阵设计初步筛选bp26-3H5抗原表位；