[发明专利]一种光滑假丝酵母菌PCR检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种光滑假丝酵母菌PCR检测试剂盒，包括PCR反应液，其特征在于，所述PCR反应液包括引物和荧光探针，所述引物分为上游引物A和下游引物A；

所述上游引物A的核苷酸序列为：

5’-ACCAGTCCCACCACCACCTGTTC-3’；

所述下游引物A的核苷酸序列为：

5’-CTTCCACAGCGTGATGAGGAGCA-3’；

所述荧光探针A的核苷酸序列为：

5’-FAM-TCAATTTCCTTCAACGAATCCCAAAGAGG-BHQ-3’。

2.按权利要求1所述的光滑假丝酵母菌PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括DNA提取液，dNTPs、tap酶、UNG酶、阳性对照、阴性对照。

3.按权利要求2所述的光滑假丝酵母菌PCR检测试剂盒，其特征在于，所述dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP、dUTP。

4.按权利要求2所述的光滑假丝酵母菌PCR检测试剂盒，其特征在于，所述DNA提取液包括：聚乙二醇辛基苯基醚、乙基苯基聚乙二醇、正辛酸，所述聚乙二醇辛基苯基醚的质量百分数为2％，所述乙基苯基聚乙二醇的质量百分数为1％，所述正辛酸的摩尔浓度为0.04M。

5.按权利要求1所述的光滑假丝酵母菌PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括提取固形物，所述提取固形物为直径0.5mm和1.0mm两种玻璃珠，按质量配比9∶1比例配制出。

6.按权利要求1所述的光滑假丝酵母菌PCR检测试剂盒，其特征在于，引入了一个人工构建的neo内参照系统用于避免检测结果假阴性，所述内参照系统的引物、探针序列组合如下：

上游引物B：5’-GACTAAACTGGCTGACGG-3’；

下游引物B：5’-GTATTTCGTCTCGCTCAG-3’；

荧光探针B：5’-TEXrd-ATGCCTCTTCCGA-BHQ-3’。

7.按权利要求1所述的光滑假丝酵母菌PCR检测试剂盒，其特征在于，所述荧光探针的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记BHQ淬灭基团。

8.一种光滑假丝酵母菌PCR检测方法，其特征在于，其中PCR扩增的靶序列如SEQ ID NO.7，PCR扩增所用引物为：上游引物A序列如：SEQ ID NO.1，下游引物A序列如：SEQ ID NO.2，荧光探针A序列如：SEQ ID NO.3。