[发明专利]琼脂培养基及其制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种琼脂培养技术领域，尤其是一种用于沙门氏菌和志贺氏菌的分离培养的琼脂培养基及其制作方法。

背景技术

市场上该产品使用的状况为硫化氢阳性的细菌的检验结果菌落中的黑心不明显，很模糊，即使是有黑心，但是其黑色面积也不够菌落的三分之一，容易造成漏检现象。

发明内容

本发明的目的就是提供一种琼脂培养基及其制作方法，增加产品的营养物质，提高目标菌的检出率，解决漏检的现象。

为了达到上述设计目的，本发明采用的技术方案如下：

一种琼脂培养基，其组成成分及质量数为：每1000ml营养液中：蛋白胨3g-7g、乳糖8g-12g、牛肉浸粉3g-7g、三号胆盐3g-7g、中性红0.023g-0.027g、琼脂13g-17g、柠檬酸钠7.5g-9.5g、柠檬酸铁1.3g-1.7g、煌绿0.0003g-0.00036g、硫代硫酸钠8.2g-8.8g。

优选地，所述其组成成分及质量数为：每1000ml营养液中：蛋白胨3g-7g、乳糖10g、牛肉浸粉5g、三号胆盐5g、中性红0.05g、琼脂15g、柠檬酸钠8g、柠檬酸铁15g、煌绿0.00033g、硫代硫酸钠8.5g。

优选地，所述营养液的主要成分为氨基酸、维生素、生长因子。

一种琼脂培养基的制作方法，包括以下步骤：

1)将蛋白胨5g、乳糖10g、牛肉浸粉5g、三号胆盐5g、琼脂15g、柠檬酸钠8g、柠檬酸铁1.5g、硫代硫酸钠8.5g溶解在1000ml营养液中；

2)混匀后，加热煮沸充分溶解；

3)调节pH至7.0±0.1。加入中性红0.025g和煌绿0.00033g；

4)煮沸灭菌1min-2min，冷却至50℃左右，倾注到一次性无菌塑料平皿中；

5)无菌检验后在2℃-8℃环境中冷藏备用。

优选地，所述调整pH至7.0±0.1的方法是，用1N-10N氢氧化钠或1N-10N盐酸溶液调节pH至7.0±0.1。

其原理为：牛肉浸粉与蛋白胨在培养基中作为基础营养物质提供细菌生长所需的碳源和氮源，三号胆盐及煌绿抑制革兰氏阳性菌和大部分大肠菌群的生长，硫化氢阳性的细菌在该培养基上生长时，硫代硫酸钠中的硫还原成S^2-，S^2-与柠檬酸铁中的铁离子结合成FeS黑色沉淀，附着菌落使菌落呈黑色，乳糖作为可发酵的碳水化合物，大肠菌群类细菌利用乳糖产酸使培养基的中性红指示剂变红色，从而使菌落显现红色，此外，由于产酸使胆盐沉淀在菌落周围形成胆酸盐沉淀环。

本发明所述的琼脂培养基及其制作方法的有益效果是：硫化氢阳性的细菌黑色的面积达到细菌本身的五分之四，使目标菌更加容易观察，解决了漏检的问题；菌落大小优胜于国内外同类产品；标本判读结果的时间比同类产品更短；沙门氏菌菌落黑心比国内外同类产品更加明显。

具体实施方式

实施例1、

一种琼脂培养基，其组成成分及质量数为：每1000ml营养液中：蛋白胨3g、乳糖8g、牛肉浸粉3g、三号胆盐7g、中性红0.027g、琼脂17g、柠檬酸钠9.5g、柠檬酸铁1.7g、煌绿0.00036g、硫代硫酸钠8.8g。

实施例2、

一种琼脂培养基，其组成成分及质量数为：每1000ml营养液中：蛋白胨7g、乳糖12g、牛肉浸粉3g、三号胆盐3g、中性红0.023g、琼脂1、柠檬酸钠7.5g、柠檬酸铁1.3g、煌绿0.0003g、硫代硫酸钠8.2g。

实施例3、

一种琼脂培养基，其组成成分及质量数为：每1000ml营养液中：蛋白胨3g-7g、乳糖10g、牛肉浸粉5g、三号胆盐5g、中性红0.05g、琼脂15g、柠檬酸钠8g、柠檬酸铁15g、煌绿0.00033g、硫代硫酸钠8.5g。

上述三个实施例中，所述营养液的主要成分为氨基酸、维生素、生长因子。

实施例4、

一种琼脂培养基的制作方法，包括以下步骤：

1)将蛋白胨3g、乳糖8g、牛肉浸粉3g、三号胆盐7g、琼脂17g、柠檬酸钠9.5g、柠檬酸铁1.7g、硫代硫酸钠8.8g溶解在1000ml营养液中；

2)混匀后，加热煮沸充分溶解；

3)调节pH至7.0±0.1。加入中性红0.027g和煌绿0.00036g；

4)煮沸灭菌1min-2min，冷却至50℃左右，倾注到一次性无菌塑料平皿中；