[发明专利]猪假attp位点及其用途

权利要求书

1.一种分离的可被ΦC31整合酶识别的寡核苷酸，其特征在于，其包含如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于，其包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

3.一种适于转化猪细胞的载体，其特征在于，包括：

第一核酸序列，所述第一核酸序列适于在ΦC31整合酶的介导下与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列发生重组；以及

目的基因，

任选地，所述第一核酸序列包括如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，

任选地，进一步包括编码筛选标记的核酸序列，所述筛选标记优选为选自编码发光蛋白的基因、药物抗性基因的至少一种，所述发光蛋白优选为选自GFP和EGFP的至少一种，所述药物抗性基因优选为选自新霉素磷酸转移酶、和潮霉素B抗性基因的至少一种，

任选地，进一步包括启动子，所述启动子与所述目的基因可操作地连接，所述启动子优选为真核细胞启动子，所述真核细胞启动子优选为CAG启动子，可选地所述真核细胞启动子为组织特异性启动子，

任选地，进一步包括增强子序列，所述增强子序列与所述目的基因可操作地连接。

4.一组适于转化猪细胞的载体，其特征在于，包括：

第一载体，所述第一载体包括：

第一核酸序列，所述第一核酸序列适于在ΦC31整合酶的介导下与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列发生重组；以及

目的基因，

第二载体，所述第二载体包括编码ΦC31整合酶或其功能等同体的核酸序列，

任选地，所述第一核酸序列包括如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，

任选地，所述第一载体进一步包括编码第一筛选标记的核酸序列，所述筛选标记优选为选自编码发光蛋白的基因、药物抗性基因的至少一种，所述发光蛋白优选为选自GFP和EGFP的至少一种，所述药物抗性基因优选为选自新霉素磷酸转移酶、和潮霉素B抗性基因的至少一种；

任选地，所述第二载体进一步包括编码第二筛选标记的核酸序列，所述第二筛选标记优选为选自编码发光蛋白的基因、药物抗性基因的至少一种，所述发光蛋白优选为选自GFP和EGFP的至少一种，所述药物抗性基因优选为选自新霉素磷酸转移酶、和潮霉素B抗性基因的至少一种，

任选地，所述第一筛选标记与所述第二筛选标记不同，

任选地，所述第一载体进一步包括第一启动子，所述第一启动子与所述目的基因可操作地连接，所述第一启动子优选为真核细胞启动子，所述真核细胞启动子优选为CAG启动子，可选地所述真核细胞启动子为组织特异性启动子，

任选地，所述第一载体进一步包括第一增强子序列，所述第一增强子序列与所述目的基因可操作地连接，

任选地，所述第二载体包括如SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列，

任选地，所述第二载体进一步包括第二启动子，所述第二启动子与所述编码ΦC31整合酶或其功能等同体的核酸序列可操作地连接，所述第二启动子优选为真核细胞启动子，所述真核细胞启动子优选为CAG启动子，可选地所述真核细胞启动子为组织特异性启动子，

任选地，所述第二载体进一步包括第二增强子序列，所述第二增强子序列与所述目的基因可操作地连接。

5.一种转基因猪细胞或其培养物，其特征在于，在所述转基因猪细胞的1号染色体上包含表达外源基因的核酸序列，所述核酸序列插入所述1号染色体的假attp位点中。

6.根据权利要求5所述的转基因猪细胞或其培养物，其特征在于，所述假attp位点的核心区具有如SEQ ID NO：3所示的寡核苷酸序列。

7.一种制备权利要求5或6所述的转基因猪细胞的方法，其特征在于，包括下列：

使用权利要求3所述的一组适于转化猪细胞的载体转化猪细胞，以便获得转基因猪细胞，优选利用所述第一载体和所述第二载体共转化所述猪细胞，任选地通过脂质体法进行所述共转化；以及

分离转基因猪细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述第一载体与所述第二载体的质量比为1∶1～5，优选1∶1。