[发明专利]用于哮喘预防和免疫治疗的嵌合型DNA疫苗Hsp70/CD80

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种哮喘预防和免疫治疗的嵌合型DNA疫苗Hsp70/CD80。 

背景技术

支气管哮喘(哮喘)是全球范围内严重威胁公众健康的一种慢性疾病。目前，全球已有约3亿哮喘患者，而我国有约2千万哮喘患者。哮喘患者随着疾病的进展，其肺功能进行性恶化，治疗难度增加，亦影响疾病的转归。当前认为，这主要在于气道持续性损伤和结构改变，即气道重塑，因而引起广泛的重视。上皮腺体增生和黏液性化生，导致黏液分泌过多，黏液栓阻塞气道，促使支气管狭窄，甚至闭塞，以及基底膜的增厚和气道平滑肌的增生与肥大，促使气道壁的增厚是慢性哮喘和重症难治性哮喘的重要特征，在致死性哮喘中尤为突出。 

目前治疗哮喘的常用药物对气道重塑的治疗作用有限，早期使用糖皮质激素可能对网状基底膜增厚有一定作用，且长期使用可产生副作用。过敏原特异性防治可以使病人症状达到较长期的缓解，但对适应症有一定要求(如高IgE病人)，需长期使用并有一定的危险(甚至造成病人死亡)。一般认为气道重塑一旦发生即难以逆转，所以深刻理解哮喘气道重塑的发病学以及寻求更安全、有效的防治方法对其控制和治愈是当前迫切需要解决的重要问题。 

哮喘的气道重塑的发生机制复杂，但免疫反应异常在其发病过程中起重要作用。调节哮喘机体的免疫平衡是重要的防治策略，也是国内外研究热点。Mosmann等提出的Th1/Th2细胞平衡理论一直作为哮喘发病机制的核心。然而，进一步研究发现，Th1细胞是前炎症细胞，其促炎症作用超过了抗炎症作用，与Th1细胞相关的炎症反应并不下调哮喘，而在Th2细胞免疫介导的疾病中哮喘的发病率也并未增高。因此，单纯的Th1/Th2细胞平衡理论不足以解释哮喘全部的发生发展过程。有研究证明哮喘患者肺泡灌洗液中CD4T细胞增加，说明CD4细胞在哮喘发病中也起到了作用。实际上，CD4T细胞至少包括了4个亚群。辅助作用是CD4T细胞的重要功能，CD4T细胞的各个亚群主要通过辅助功能调节着机体的免疫反应。近年来研究表明，除Th1和Th2效应细胞外，其它一些CD4T细胞亚群在哮喘发病中也起了重要作用。如CD17与嗜中性细胞炎症有关；与免疫耐受有关的调节性T细胞在控制哮喘的发病中起重要作用。这些细胞亚群可由于接受信号的差异、信号传导途径的不同、转录因子的特点、分泌不同细胞因子等加以区别，这些CD4T细胞亚群的分析探讨也是近年来哮喘研究中逐步开始的热点。 

调节哮喘机体的免疫平衡的方法大体分为过敏原特异性的防治和过敏原非特异性防治两类，过敏原非特异性防治方法能从各种变应原所致免疫反应的共同途径着手进行干预，是支 气管哮喘免疫防治的重要策略。DNA疫苗是近年来研究的一种新型疫苗，具有成分清楚、制备简单等优点，而成为免疫调节剂的较好选择，其独特的免疫方式和良好的免疫效果而倍受关注。 

热休克蛋白是一类具有重要生物和免疫功能的高度保守的蛋白质，存在于原核和真核细胞中。分支杆菌HSP70包含多个T细胞和B细胞表位，具有免疫优势抗原的特点，能诱导出明显的Th1型细胞反应，调节机体的免疫平衡。CD80是重要的具有免疫活化功能的共刺激分子之一。CD80与其共刺激受体CD28和/或CTLA-4间相互作用可提供T细胞活化所必需的协同刺激信号，对体液免疫和细胞免疫具有全面的活化作用。在之前公开的专利CN1562362A中，将结核杆菌HSP70基因与人CD80基因拼接构成结核菌HSP70/人CD80嵌合DNA真核表达质粒，即HSP70/CD80嵌合DNA疫苗。其中具体使用的质粒载体为pcDNA3.1(+)结果发现该嵌合DNA质粒，对结核菌有很强的抑制作用，显示出明显免疫预防及治疗作用。基于上述实验结果和分析，我们认为HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可能从干预各种变应原所致免疫反应的共同途径着手，形成防治哮喘的另一方法。也在实验中证明了其功效，并发表于《中华结核和呼吸病杂志》2009年第9期。