[发明专利]一种制备重组人胰岛素原的方法

权利要求书

1.一种制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，利用扩张床吸附技术从含有重组人胰岛素原的料液中纯化胰岛素原。

2.根据权利要求1所述的制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，所述含有重组人胰岛素原的料液为大肠杆菌表达的包涵体复性液，或酵母表达培养液的过滤上清。

3.根据权利要求1所述的制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，所述重组人胰岛素原，其氨基酸序列与天然人胰岛素原的氨基酸序列相同或不同。

4.根据权利要求1所述的制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，包含以下步骤：

a、柱平衡：扩张床树脂柱先用流动相Ⅰ平衡约3～10个柱体积，平衡流速为200～1000cm/h，管路中液体流向为从树脂柱底部向上流动，使柱中树脂扩张到固定床体积的1～5倍；

b、上样：将含重组人胰岛素原的料液上样到扩张床树脂柱，上样流速为200～1000cm/h，管路中液体流向为从树脂柱底部向上流动，使柱中树脂扩张到固定床体积的1～5倍；

c、洗涤：上样完毕，用流动相Ⅱ洗涤约3～10个柱体积，洗涤流速为200～1000cm/h，管路中液体流向为从树脂柱底部向上流动，使柱中树脂扩张到固定床体积的1～5倍；

d、洗脱：使树脂自然沉降，将柱顶分布器下降至树脂表面并压紧树脂，从扩张床顶部向下进液，流速调整为50～500cm/h，用流动相Ⅱ：流动相Ⅲ梯度洗脱约5～20个柱体积，收集洗脱峰，

其中：

流动相Ⅰ的组分为盐浓度为0～1.0M的缓冲液、pH3.0～10.0的缓冲液；流动相Ⅱ的组分为盐浓度为0～0.5M的缓冲液、pH3.0～10.0的缓冲液；流动相Ⅲ的组分为盐浓度为0～2.0M的缓冲液、pH3.0～10.0的缓冲液。

5.根据权利要求4所述的制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，所述扩张床树脂为离子交换型或疏水吸附型扩张床树脂。

6.根据权利要求4所述的制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，所述步骤a流动相Ⅰ为10mM NaAc-HAc、pH3.0～6.0、0～0.8M NaCl，或是10mM Tris-HCl、pH8.0～10.0、0～0.8M NaCl。

7.根据权利要求4所述的制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，所述步骤c流动相Ⅱ为10mM NaAc-HAc、pH3.0～6.0、0.1～0.5M NaCl或是10mM Tris-HCl、pH8.0～10.0、0.1～0.5M NaCl。

8.根据权利要求4所述的制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，步骤d洗脱扩张床树脂柱过程中的流速为50～500cm/h。

9.根据权利要求4所述的制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，所述步骤d流动相Ⅲ为10mM NaAc-HAc、pH3.0～6.0、0～1.5M NaCl或是10mM Tris-HCl、pH8.0～10.0、0～1.5M NaCl。

10.根据权利要求4所述的制备重组人胰岛素原的方法，其特征在于，所述步骤d梯度洗脱程序为线性梯度，即流动相Ⅲ占洗脱体系的体积比例由40％逐渐升至100％。