[发明专利]一种质粒DNA或反义寡核苷酸转染附植前胚胎的方法

权利要求书

1.一种质粒DNA或反义寡核苷酸转染附植前胚胎的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将待转染的质粒DNA用电转缓冲液稀释至浓度为10～80μg/ml，得到质粒DNA电穿孔溶液；

或者将待转染的反义寡核苷酸用电转缓冲液稀释至浓度为0.2mM，得到反义寡核苷酸电穿孔溶液；

2)将待转染的附植前胚胎置于酸性台氏液中，室温孵育10～20s，然后终止消化并清洗；

3)将质粒DNA电穿孔溶液或反义寡核苷酸电穿孔溶液加入电转皿两根电极之间的凹槽中，将附植前胚胎线性排列在电转皿的两根电极之间，在脉冲电场下，利用电穿孔法对附植前胚胎进行转染。

2.如权利要求1所述的质粒DNA转染附植前胚胎的方法，其特征在于，所述的质粒DNA在转染前还进行去内毒素处理，将去内毒素处理的质粒DNA用电转缓冲液进行稀释。

3.如权利要求1所述的质粒DNA转染附植前胚胎的方法，其特征在于，所述的将附植前胚胎在进行酸性台氏液处理之前，还对胚胎用H-KSOM溶液清洗。

4.如权利要求1所述的质粒DNA转染附植前胚胎的方法，其特征在于，所述的终止消化是将胚胎从酸性台氏液转移到H-KSOM溶液中清洗，然后再用溶液清洗。

5.如权利要求1所述的质粒DNA转染附植前胚胎的方法，其特征在于，所述的转染的质粒DNA为带有荧光基因的质粒DNA；

所述的反义寡核苷酸在转染前还进行lissamine标记，将lissamine标记的反义寡核苷酸用电转缓冲液进行稀释。

6.如权利要求1所述的质粒DNA转染附植前胚胎的方法，其特征在于，所述的转染的质粒DNA包括一种或多种以上序列不同的质粒DNA。

7.如权利要求1所述的质粒DNA转染附植前胚胎的方法，其特征在于，所述的附植前胚胎包括处于不同发育时期的附植前胚胎。

8.如权利要求1所述的质粒DNA转染附植前胚胎的方法，其特征在于，所述的电穿孔法进行质粒DNA转染的参数控制为：电压20V～40V；脉冲时间1～2ms；脉冲次数3～4次。

9.如权利要求1所述的质粒DNA转染附植前胚胎的方法，其特征在于，所述的附植前胚胎为小鼠附植前胚胎，电转参数控制为：电压20V～40V；脉冲时间1～2ms；脉冲次数3～4次。

10.如权利要求1所述的质粒DNA转染附植前胚胎的方法，其特征在于，所述的电穿孔完成后，将转染后的胚胎清洗并转移入KSOMaa培养液中培养。