[发明专利]一种甲型流感病毒甄别与耐药检测基因芯片的制备和用途

权利要求书

1.一种检测甲型流感病毒核酸亚型和耐药性的基因芯片，其制备方法包括：

1)步骤一：

制备3对通用引物，序列如表1所示：

表1引物序列

2)步骤二：

制备10条流感亚型核酸分型探针，序列如表2所示：

表2流感亚型核酸分型探针序列

制备6条耐药检测探针，序列如表3所示：

表3耐药检测探针序列

3)步骤三：

将步骤二中的各个寡核苷酸探针用6×SSC，0.1％SDS稀释至终浓度50μM，并点到空白的醛基化修饰玻片上，阵列如表4所示，其中片基质控探针为20T序列，5’端cy3标记、3’端NH2修饰；阴性探针为与病毒无关的植物基因序列；通用序列为甲型流感病毒保守序列；引物1、2、3分别为引物NR21、NR22和NF5的反向互补序列，每条序列3’端NH₂修饰，所有探针的点样量均为3nl，使用前至少在室温放置干燥18小时；

表4寡核苷酸探针阵列

  片基质控  引物1  引物2  引物3  通用序列  阴性探针  阴性探针  片基质控  NEW-1  NEW-2  H1N1-1  H1N1-2  H3N2-1  H3N2-2  AIV-1  AIV-2  NEW-1  NEW-2  H1N1-1  H1N1-2  H3N2-1  H3N2-2  A1V-1  A1V-2  NEW-1  NEW-2  H1N1-1  H1N1-2  H3N2-1  H3N2-2  AIV-1  AIV-2  OSE-1  OSE-2  OSE-3  OSE-4  OSE-5  OSE-6  SIV-1  SIV-2  OSE-1  OSE-2  OSE-3  OSE-4  OSE-5  OSE-6  SIV-1  SIV-2  OSE-1  OSE-2  OSE-3  OSE-4  OSE-5  OSE-6  SIV-1  SIV-2  片基质控  阴性探针  阴性探针  通用序列  引物3  引物2  引物1  片基质控

4)步骤四：

制备RT-PCR体系，配方如表5所示：

表5R TPCR体系配方

5)步骤五：

制备杂交液，其组成为4×SSC，0.3％SDS，5％甲酰胺，16μM 20T-NH₂；制备洗液A，其组成为1×SSC，0.2％SDS；制备洗液B，其组成为0.2×SSC；制备洗液C，其组成为0.1×SSC。

2.根据权利要求1所述的基因芯片，其特征还在于用于甲型流感病毒核酸分型和甲型流感病毒达菲耐药性检测。