[发明专利]通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法无效
| 申请号： | 201110398621.6 | 申请日： | 2011-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN102492685A | 公开（公告）日： | 2012-06-13 |
| 发明（设计）人： | 何洪彬;王洪梅;武建明;刘蓝;吕洋;杨宏军;宋玲玲;孙涛;高运东;侯明海;仲跻峰 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院奶牛研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/873;A61D19/04;A01K67/027 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 杨琪 |
| 地址： | 250100 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 通过 口蹄疫病毒 受体 整合 基因 获得 口蹄疫 转基因 方法 | ||
1.一种通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于：是将线性化的携带有报告基因的突变的整合素β6亚基基因的打靶载体转染羊或猪的胎儿成纤维细胞，通过同源重组获得替换整合素β6亚基基因的核供体细胞，将核供体细胞核导入羊或猪的去核卵母细胞中得到重构胚，再将重构胚移入代孕羊或猪的子宫中，得到的子代即为整合素β6亚基基因被敲除的杂合子转基因羊或猪。
2.根据权利要求1所述的通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于，还包括以下方法：杂合子转基因羊或猪经二次打靶和体细胞克隆获得纯合子转基因羊或猪；
或：杂合子转基因公畜和杂合子转基因母畜正常交配繁殖而获得纯合子转基因羊或猪。
3.根据权利要求1或2所述的通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于：所述羊为绵羊或山羊。
4.根据权利要求1或2所述的通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于：所述羊或猪胎儿成纤维细胞为35～50日龄胎儿不同组织来源的成纤维细胞。
5.根据权利要求1或2所述的通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于：所述羊或猪胎儿成纤维细胞为耳成纤维细胞、皮肤成纤维细胞、输卵管上皮细胞或卵丘细胞。
6.根据权利要求1或2所述的通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于：所述将线性化的携带有报告基因的突变的整合素β6亚基基因的打靶载体转染羊或猪胎儿成纤维细胞方法为电转染法、脂质体转染法、病毒载体法或磷酸钙沉淀法。
7.根据权利要求6所述的通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于：所述将线性化的携带有报告基因的突变的整合素β6亚基基因的打靶载体转染羊或猪胎儿成纤维细胞方法为脂质体转染法。
8.根据权利要求7所述的通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于：所述脂质体转染法的条件为：线性化的载体DNA浓度不低于1μg/μL，DNA∶脂质体LTX＝1∶3。
9.根据权利要求1或2所述的通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于：所述将线性化的携带有报告基因的突变的整合素β6亚基基因的核供体细胞核导入羊或猪的去核卵母细胞的方法为显微注射法。
10.根据权利要求1或2所述的通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因羊或猪的方法，其特征在于：所述去核卵母细胞不带有第一极体。
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