[发明专利]一种分子检测信号放大技术无效
申请号: | 201110394708.6 | 申请日: | 2011-12-02 |
公开(公告)号: | CN102492772A | 公开(公告)日: | 2012-06-13 |
发明(设计)人: | 王升启;张春;刘琪琦;陈苏红;彭贤慧 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;G01N33/53 |
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地址: | 100850*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 分子 检测 信号 放大 技术 | ||
1.一种生物分子检测信号放大技术,其特征在于将量子点标记的链霉亲和素、抗原、抗体、多肽与固定在固相材料上的生物分子特异性结合过程、酪胺信号放大过程和银增强染色信号放大过程。
2.如权利要求1所述量子点,其特征在于:
量子点为直径小于100nm半导体纳米材料。
3.如权利要求2所述量子点,其特征在于:
量子点为由II-VI族或III-V族元素中两种或两种以上元素组成的以及由II-VI族或III-V族元素与其他元素组成的纳米颗粒。
4.如权利要求2所述量子点,其特征在于:
量子点为直径在1-100nm之间,能够发射荧光的具有核壳结构的半导体纳米晶体粒子,如:ZnS,CdS,HgS,CdSe,CdTe,MgSe,MgS,MgTe,ZnO,ZnTe,CdSe/HgSe,CdS/ZnS,CdS/Ag2S,CdS/PbS,CdS/Cd(OH)2,CdS/HgS,CdSe/CdS,MgS,MgSe,MgTe,CaS,CaSe,CaTe,SrS,SrSe,BaS,BaSe。由以上任意两种及以上纳米粒子组成和由一种及一种以上纳米粒子为核形成的纳米复合粒子。
5.如权利要求1所述固相材料,其特征在于:
固相材料包括:玻璃、塑料、金属、高分子材料和聚苯乙烯、NC膜、纤维素膜、96孔板。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)待检测分子与探针分子特异性结合;
(2)抗原或者抗体与待检测分子特异性结合;
(3)酪胺信号放大过程;
(4)银增强染色信号放大过程;
(5)信号处理;
7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)待检测分子与探针分子特异性结合;
(2)生物素标记的抗原、抗体或蛋白与待检测分子特异性结合;
(3)量子点标记的链霉亲和素特异性结合;
(4)银增强染色信号放大过程;
(5)信号处理;
8.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)待测基因的纯化、扩增,对扩增的下游引物末端标记法引入生物素进行核酸标记;
(2)杂交;
(3)量子点标记的链霉亲和素特异性结合;
(4)银增强染色信号放大过程;
(5)信号处理;
9.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)待测基因的纯化、扩增,对扩增的下游引物末端标记法引入生物素进行核酸标记;
(2)杂交;
(3)酪胺信号放大过程;
(4)银增强染色信号放大过程;
(5)信号处理;
10.根据权利要求6、9所述的检测方法,其特征在于步骤(3)酪胺信号放大过程:
在已经完成特异性结合的相应区域加入链酶亲和素标记的辣根过氧化物酶。通过生物素与链酶亲和素特异性的结合引入HRP;然后加入生物素标记的酪胺,通过酶催化作用使大量标记生物素的酪胺分子沉积。
11.根据权利要求6、7、8、9所述的检测方法,其特征在于步骤(4)银增强染色信号放大过程:在相应区域加入链酶亲和素标记量子点。生物素与链霉亲和素特异性的结合,将量子点引入到待检测分子上;加入银染色试剂利用量子点小尺寸催化还原作用,可以将周围的银离子还原成银颗粒;而银颗粒又可以催化还原周围的银离子,形成肉眼可见的检测信号。
12.根据权利要求6、7、8、9所述的检测方法,其特征在于步骤(5)信号处理:
信号可以肉眼观察也可以用普通的光学扫描仪器扫描分析或普通成像仪器记录。
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