[发明专利]大叶蟹甲草中绿原酸的提取工艺

说明书

技术领域

本发明属于医药产品研究技术领域，特别涉及大叶蟹甲草中绿原酸的提取工艺。

背景技术

大叶蟹甲草Parasenecio firmus (Komar.) Y. L. Chen，又名大叶兔儿伞，为菊科蟹甲草属的植物，产中国吉林省抚松、长白山、浑江等地。生于密林下或林缘和林中空地，海拔800～1100米，朝鲜北部也有。

绿原酸具有广泛的生物活性，现代科学对绿原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域。绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用；现代药理实验证明杜仲绿原酸有抗癌和抑癌之功效，日本学者研究了杜仲绿原酸的变异原性抑制作用，发现该作用与绿原酸等抗变异原性成分有关，揭示了绿原酸对肿瘤预防的重要意义；绿原酸作为一种自由基清除剂及抗氧化剂已被大量的试验证明，绿原酸的这种生物活性，对心血管系统能产生保护作用；经多年临床试验证实，杜仲绿原酸有明显的降压作用，而且疗效平稳，无毒、无副作用。卫生部 《药品标准》 收录具有清热解毒、 抗菌消炎的中成药170种，均含有绿原酸且为主要成分。目前，在银黄制剂、双黄连制剂等药品的生产中，已将绿原酸作为质量控制的重要指标之一。绿原酸等多酚类物质被称为“第七类营养素”，被广泛用于保健行业，添加了绿原酸的保健药品具有清热解毒、养颜润肤等特点。此外绿原酸还是重要的化学试剂，在生化分析和化学工业中都具有广泛的应用。

但截至目前，尚未有关大叶蟹甲草中绿原酸化学成分的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大叶蟹甲草中绿原酸的提取工艺。

本发明采用的技术方案如下：

大叶蟹甲草中绿原酸的提取工艺，将大叶蟹甲草的粗粉加入乙醇进行提取，提取液萃取后萃取液分离纯化获得绿原酸。

加入乙醇进行提取的过程如下：将大叶蟹甲草干燥粗粉加入为粗粉8～10倍质量的乙醇溶液浸泡过夜，然后超声提取20-40min，提取液回收乙醇；所述乙醇溶液质量浓度为70-90%。

超声提取时频率为80-100Hz，温度为25-30℃。

进一步，重复粗粉加入乙醇超声提取以及回收提取液中乙醇的过程3～5次，合并提取液进行萃取。

萃取时提取液加入等体积的水混和均匀后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各萃取三次，收集乙酸乙酯层组分。

将乙酸乙酯层组分50-70℃水浴蒸干后溶于无水乙醇中，拌以等体积的硅胶，挥干溶剂后通过硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，合并相同组分并进行硅胶柱层析、纯化后得到绿原酸。

梯度洗脱时石油醚与乙酸乙酯的比例依次为15:1、12:1、10:1、8:1、5:1、1:1、1:2、1:5，收集10:1洗脱液中相同组分。

具体的，制备绿原酸包括以下过程：

步骤1）：将大叶蟹甲草干燥粗粉（40目）加入8～10倍量的80%乙醇浸泡过夜，超声（80Hz，30℃）提取30min，提取液回收乙醇浓缩至无醇味，如此反复提取3～5次，合并浓缩液；

步骤2）：将1）中浓缩液加入与浓缩液等量的水，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取三次，由此得到乙酸乙酯层部分；

步骤3）：将2）中乙酸乙酯部分60℃水浴蒸干后溶于无水乙醇中，拌以硅胶（100～200目），挥干溶剂，通过硅胶（200～300目）柱层析，洗脱溶剂选择石油醚：乙酸乙酯（15:1～1:5）梯度洗脱；

步骤4）：将3）中所得10:1洗脱液用TLC检测，合并相同组分，减压浓缩，再反复进行硅胶柱层析；

步骤5）：将4）中相似流分合并，减压浓缩，得浓缩液，析出结晶。

步骤6）：将5）中晶体用甲醇重结晶得到绿原酸单体。

本发明所述制备绿原酸的原料为大叶蟹甲草Parasenecio firmus (Komar.) Y. L. Chen的全草。

本发明相对于现有技术，有以下优点：

本发明获得的绿原酸主要具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。制备方法简单，提取率为1.2%。

具体实施方式

   以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此：

实施例1