[发明专利]用于确定钴60辐照灭活动物源性生物材料病毒的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学工程领域，具体涉及一种用于确定钴60辐照灭活动物源性生物材料病毒的方法。

背景技术

医疗器械种类广泛，其中包括各种动物组织材料。动物组织和其衍生物在特性方面要优于无生命体材料如金属、塑料或者纺织品。

动物组织材料的数量和品种也是多样的。动物组织材料可以作为医疗器械的主要组成(如猪、牛的心脏，羊肠缝合线、止血材料等)，或者是医疗器械产品外结构或者巩固体(如肝磷脂、凝胶、胶原等)，或者用于生产加工过程(如动物脂)。所以，动物源性医疗器械产品在所有医疗器械产品中占有重要比例。

目前国内市场上的动物源性医疗器械根据国家食品药品监督管理局2002年发布的医疗器械产品分类目录分为三类，三类医疗器械是：植入材料，如：异种皮质骨、人工骨，骨修复材料、骨填充材料，心脏或组织修补材料，如：牛或猪心包生物瓣膜、心脏补片；眼内充填材料，如：医用透明质酸钠等；接触式人工器官，如：人工皮肤、异体脱细胞真皮；医用卫生材料及敷料中可吸收性止血、防粘性材料，如：生物蛋白胶、医用胶原膜、透明质酸；医用缝合材料中：医用可吸收胶原缝合线、羊肠线等，部分含异种动物血清的体外诊断试剂，如：高密度脂蛋白胆固醇试剂盒等。

对于动物来源的要求，必须是非疫区国家。根据国药监械2002[112]号文件规定，禁止来自疫区的牛羊组织细胞等医疗器械产品进入中国。欧盟中只有瑞典是唯一未发生过BSE的国家。

为了提高动物源性生物材料使用的安全性，尽量消除人兽共患病以及相关的潜在风险(如：疯牛病，口蹄疫，禽流感等)，因此必须对动物源性生物材料制备过程中的病毒灭活(去除)工艺进行验证(评价)。但到目前为止，国家尚未有相关的技术标准出台，因此为相关企业提供有效的病毒灭活/去除的技术指导方案尤为迫切。

发明内容

针对目前缺乏动物源性生物材料病毒灭活效果技术标准的现状，本发明的目的在于提供一种用于确定钴60辐照灭活动物源性生物材料病毒的方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种用于确定钴60辐照灭活动物源性生物材料病毒的方法，包括以下步骤：

(1)用指示病毒感染动物源性生物材料，然后测定动物源性生物材料中的病毒滴度值；

(2)将受指示病毒感染的动物源性生物材料进行一定剂量的钴60辐照处理，测定处理后材料的病毒滴度值；

(3)若辐照处理前后动物源性生物材料中的病毒滴度差值大于4LgTCID50/0.1ml，则采用该辐照剂量是有效的；若灭活处理前后动物源性生物材料中的病毒滴度差值小于或等于4LgTCID50/0.1ml，则需要增大辐照剂量。

所述的指示病毒可以是RNA病毒或DNA病毒，可以是有包膜病毒或无包膜病毒；

所述的指示病毒优选猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、科萨奇病毒3型或合胞病毒；当指示病毒为上述4种病毒时，本发明的评价方法更加准确。

所述的动物源性生物材料为骨松骨。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1、本发明选用指示病毒对动物源性生物材料制备过程中灭活(去除)病毒工艺进行有效评价(验证)，从而为动物源性生物材料的使用提供安全保证，消除潜在的病毒感染风险。

2、本发明的评价方法具有操作方法简便，评价结果可靠性高等优点。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

骨松骨钴60辐照灭活柯萨奇3型病毒效果验证，包括以下步骤：

(1)取0.9g骨松骨(由广东冠吴生物科技股份有限公司提供；下同)，放入9ml柯萨奇3型病毒CVB3(购自武汉病毒研究所)液(病毒滴度为5.75LgTCID50/0.1ml)中，于4℃浸泡吸附16小时，取出；将0.9g吸附了柯萨奇3型病毒CVB3的骨松骨分为3份，每份0.3g，取其中一份加入3ml无牛血清培养液研磨成10％悬液，于4000r/min离心15分钟，吸取上清，除菌过滤，测定其中柯萨奇3型病毒CVB3的滴度值(滴度测定采用96孔细胞病变法，计算按Karber法；下同)，为对照样本病毒滴度值；

(2)取步骤(1)中另外2份受柯萨奇3型病毒CVB3感染的骨松骨进行钴60辐照处理，辐照剂量为20kGy；然后用3ml无牛血清培养液研磨成10％悬液，于4000r/min离心15分钟，吸取上清，除菌过滤，测定其病毒滴度；

以上试验重复3个批次。