[发明专利]一种制备不同分子量玻璃酸钠的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种制备不同分子量玻璃酸钠的方法。

背景技术：

玻璃酸((Hyaluronic Acid简称HA)是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺双糖单位反复交替而形成的一种均聚物，其重均分子量一般为10万～1000万Da，玻璃酸钠(sodium hyaluronate)为玻璃酸的钠盐形式，不同分子量的玻璃酸钠具有不同的生物活性。

目前临床上应用的玻璃酸钠制剂，如眼科手术用黏弹剂、治疗关节炎的关节腔注射液、术后防粘连制剂、滴眼液等，所用HA的平均分子量般为50万～500万。低分子量HA(LMW-HA)的分子量范围尚无统一标准，一般为1万～50万，而HA寡聚糖(oligosaccharides of HA，简称o-HA)为分子量在1万以下，单糖残基数量为2～40(般为4～16)的HA分子片段。LMW-HA还属于大分子多糖范畴，在物理性质和生物活性方面与普通HA接近，而o-HA属于小分子多糖，其性质与普通HA有很大不同，甚至具有完个相反的作用。

研究表明，HA的多种生物活性具有分子量依赖性，LMW-HA或o-HA的某些生物活性，(高分子)HA就没有或具有相反的作用。

West等发现3～16个双糖单位的HA片段在体内具有促血管生成作用，在体外可促进内皮细胞的增生。而高分子量HA在体外抑制内皮细胞的增生，在体内抑制新血管的生成。

Deed等的体外实验表明，具有促血管生成oligo-HA(o-HA)可快速诱导动脉内皮细胞相关基因表达水平的提高。oligo-HA与细胞表面受体的结合，并通过信号传递，诱导相关的表达，从而促进内皮细胞的增生。oligo-HA可促进内皮细胞合成I型和VIII型胶原，这两种胶原在血管生成过程中具有重要作用。

Termeer等试验表明，只有HA小分子片段(4糖和6糖)可诱导具有免疫作用的树突细胞的成熟化，并促进树突细胞产生白介素、肿瘤坏死因子等细胞因子，而分子量在8万～20万或更高的HA则无此作用。oligo-HA的这种作用具有专属性，其他糖胺聚糖如硫酸软骨素或硫酸乙酰肝素或其降解产物没有这种作用。在炎症过程中，内源性HA被降解成的小分子片段，对树突细胞和巨噬细胞等免疫活性细胞具有强力活化作用。这种作用是通过钟状受体4-(TLR-4)介导的，而不是CD44受体。

有专利报通分子量为2万～6万的LMW-HA可刺激体外培养的骨细胞的增生，增加培养基中骨细胞集落的数目和单个集落的面积。由此可见关节腔注射HA，不但可以起润滑作用，HA经过一段时间被降解成LMW-HA，还具有促进细胞生长的作用。

发明内容：

本发明的目的是提供一种制备不同分子量玻璃酸钠的方法，该方法采用酸碱水解结合法制备了不同小分子量的玻璃酸钠。

为实现本发明的目的，本发明的技术方案是：

一种制备不同分子量玻璃酸钠的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)向玻璃酸钠溶液中加入氢氧化钠进行碱水解得碱水解液，其中碱水解液中氢氧化钠的浓度为0.05-2mol/L，碱水解温度为60℃-85℃，碱水解时间110-180min；

(2)向步骤(1)所得的水解液中加入氯化钠进行酸水解得酸水解液，其中酸水解液中氯化钠的质量含量为0.5-4％，用盐酸调pH值为2.0-4.0，酸水解温度为70-100℃，酸水解时间为180-300min；

(3)向酸水解液中加乙醇使玻璃酸钠沉淀，脱水干燥，得不同分子量玻璃酸钠。

在本发明的一优选实施例中，所述步骤(1)中，玻璃酸钠溶液中玻璃酸钠的质量含量为0.1-1％。

在本发明的一更优选实施例中，所述步骤(1)中，玻璃酸钠溶液中玻璃酸钠的质量含量为0.5％。

在本发明的一更优选实施例中，所述步骤(1)中，碱水解液中氢氧化钠的浓度为0.15-0.20mol/L。

在本发明的另一更优选实施例中，所述步骤(1)中，碱水解液中氢氧化钠的浓度为0.18mol/L。

在本发明的一更优选实施例中，所述步骤(1)中，碱水解温度为60-75℃，碱水解时间120-180min；

在本发明的另一更优选实施例中，所述步骤(1)中，碱水解温度为75℃，碱水解时间180min；

在本发明的一更优选实施例中，步骤(2)中，酸水解液中氯化钠的质量含量为2％。

在本发明的一更优选实施例中，步骤(2)中，酸水解温度为86℃，酸水解时间为240min。