[发明专利]一种二型肽聚糖识别蛋白及其制备和应用

权利要求书

1.一种二型肽聚糖识别蛋白，其特征在于：二型肽聚糖识别蛋白如序列表SEQ ID No.1中氨基酸序列所示。

2.一种权利要求1所述的二型肽聚糖识别蛋白表达载体的构建方法，其特征在于：

以美国红鱼cDNA为模板，用引物PGRPF1和PGRPR1进行PCR扩增，扩增产物纯化后与载体pBS-T于室温连接2-8小时，连接混合液转化大肠杆菌，筛选转化子提取质粒，即为质粒pBSPGRP1；将质粒pBSPGRP1和质粒pET259分别用限制性内切酶EcoRV和Swa I酶切后回收1.4kb和5.4kb片段，将这二片段用T4DNA连接酶连接，连接液转化入大肠杆菌，筛选转化子提取质粒，即为二型肽聚糖识别蛋白表达载体pPGRP2；

所述引物PGRPF1和PGRPR1分别为：PGRPF1，5’-GATATCATGAGGCCAGCAGGTGTC    -3’；PGRPR1，5’-CGATATCATCTCTGAAGTGCTCCCA-3’。

3.按权利要求2所述的二型肽聚糖识别蛋白表达载体的构建方法，其特征在于：

将上述所得二型肽聚糖识别蛋白表达载体pPGRP2转化大肠杆菌BL21(DE3)，筛选转化子即为BL21/pPGRP2，将BL21/pPGRP2于含有卡那霉素的LB培养基中于37℃培养至OD₆₀₀为0.8，并加入终浓度为0.2mM的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，再以18℃继续培养8-10小时，而后用亲和层析柱纯化重组蛋白，即为序列表SEQ ID No.1中氨基酸序列所示的二型肽聚糖识别蛋白。

4.一种权利要求1所述的二型肽聚糖识别蛋白的应用，其特征在于：所述序列表SEQ ID No.1中氨基酸序列的二型肽聚糖识别蛋白可作为革兰氏阳性细菌的杀菌剂。

5.按权利要求4所述的二型肽聚糖识别蛋白的应用，其特征在于：所述革兰氏阳性细菌为海豚链球菌(Streptococcus iniae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subilis)。