[发明专利]HPV16E7单克隆抗体、相关杂交瘤细胞株和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程和免疫学技术领域，更具体地，涉及单克隆抗体技术领域，特别是指一种HPV16E7单克隆抗体、相关杂交瘤细胞株和应用。

背景技术

宫颈癌是女性生殖系统的常见恶性肿瘤，位居女性恶性肿瘤第二位。大量研究发现，人乳头瘤病毒HPV(human papilloma virus)是导致宫颈癌的元凶，还可以引起多种其它肿瘤，包括生殖道、乳腺、消化道、及呼吸道癌症。HPV近年来在我国人群中的传播有增无减，故宫颈癌预防、治疗的研究工作非常重要。

1949年，Sttauss首先在电镜下于疣体浸出液中观察到人乳头瘤病毒(HPV)颗粒。在1976年zur Hansen提出HPV可能是性传播致癌因素之后，HPV感染与宫颈癌关系的研究成为肿瘤病毒病因研究的热门课题。HPV是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒，属双链闭环的小DNA病毒，包含约8000个碱基对。其中包括8个早期开放读码框架(E1-E8)、2个晚期读码框架和1个非编码长控区。在早期开放读码框架中，E6和E7基因对细胞生长刺激最为重要，E6、E7编码的E6、E7蛋白引起宫颈上皮细胞永生化。而晚期读码框L1和L2基因分别编码HPV的主要和次要衣壳蛋白，组装成HPV的衣壳。

高危亚型HPV的E6，E7蛋白导致正常上皮细胞转化成癌症细胞的因果关系已被科学证明。因此，需要提供一种HPV16E7单克隆抗体及分泌HPV16E7单克隆抗体的杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞能稳定分泌HPV16E7单克隆抗体，为进一步研究HPV16E7的功能，用于癌症治疗和癌症检测的研究奠定基础。

发明内容

本发明的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种HPV16E7单克隆抗体、相关制备方法、杂交瘤细胞株和应用，该HPV16E7单克隆抗体能特异性检测HPV16E7，可用于HPV16高危致癌病毒亚型的感染，及宫颈癌早期诊断的特异性检测。特异性高，反应灵敏，成本低，适于大规模推广应用。

为了解决上述目的，在本发明的第一方面，提供了一种HPV16E7单克隆抗体，其特点是，所述HPV16E7单克隆抗体是对SEQ ID NO：2所示的蛋白能特异性结合的单克隆抗体。

本发明中所述“特异性”是指单克隆抗体对相应抗原或近似抗原物质的识别能力。特异性高，对抗原的识别能力就强。因此，上述的HPV16E7单克隆抗体能够特异性识别和结合SEQ ID NO：2所示的蛋白。SEQ ID NO：2所示的蛋白可以直接合成，也可以通过基因工程方法制备。在本发明的一具体实施例中，SEQ ID NO：2所示的蛋白可以是由SEQ ID NO：1第1至291位核苷酸编码产生。

制备本发明的单克隆抗体所用的抗原是通过基因工程的方法获得，利用在原核生物中表达含有编码本发明的抗原的多核苷酸序列SEQ ID NO：1。本领域的技术人员通常熟知适用于表达本发明的抗原的载体。可根据所选用的适当启动子和待表达的目的基因序列来选择适当的载体。可使用任何适当的宿主细胞表达本发明的抗原。适当宿主的例子包括：原核细胞如大肠杆菌、芽孢杆菌、链霉菌等。转导、转化或转染的方法是本领域已知的，包括，但不限于，病毒感染、氯化钙转染法、脂质体转染法、电穿孔法或微粒轰击法等。为了活化启动子、选择转化体或扩增所需的基因，可以在适当修饰的常规营养培养基中培养被转导、转染或转化的宿主细胞。培养中所使用的温度、pH值等培养条件一般都是由所选用的表达特定蛋白质的宿主细胞决定的，并且这些条件都是本领域技术人员熟知的。为了大量获得重组蛋白，可以采用诱导型启动子，并利用诱导物诱导基因的表达。实质上，“诱导物”可以是任何能诱导宿主中基因表达的物质，可以是化学物质或环境刺激。

较佳地，所述单克隆抗体是采用SEQ ID NO：2所示的蛋白与已知标签形成的融合蛋白作为抗原免疫动物得到的。

更佳地，所述已知标签是，但不限于，组氨酸标签(His标签)、谷胱苷肽S-转移酶(GST标签)、Trx标签、S-tag标签、HA标签、HSV标签、Myc标签或VSV-G标签。在本发明的一具体实施例中，所述已知标签是GST标签，与SEQ ID NO：2所示的蛋白形成GST-HPV16E7融合蛋白。

更佳地，所述单克隆抗体是采用所述融合蛋白作为抗原免疫小鼠得到的。

更进一步地，所述单克隆抗体对HPV16E7有特异性，对HPV16L2没有特异性。

较佳地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC5199或CGMCC5200的杂交瘤细胞株产生。