[发明专利]一种金银花组织培养及其培养基制备

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养及其培养基的制作方法，属于生物细胞工程技术领域，具体地说是一种金银花组织培养及其培养基制备。

背景技术

金银花(Lonicera Japonica)又名忍冬，为忍冬科多年生半常绿缠绕木质藤本植物。“金银花”一名出自《本草纲目》，由于忍冬花初开为白色，后转为黄色，因此得名金银花。药材金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花。金银花自古被誉为清热解毒的良药。它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等证，均效果显著。含绿原酸类、甙类、黄酮类、挥发油类成分；甙类成分包括皂甙、环烯醚萜甙等，如以长春藤甙元为配基的三萜皂甙、以石竹素为甙元的三萜皂甙；黄酮类化合物木犀草素-7-O-a-D-葡萄糖甙、木犀草素-7-O-b-D-半乳糖甙、槲皮素-3-O-b-D-葡萄糖甙、金丝桃甙等；挥发油中含30种以上成分，主成分为双花醇和芳樟醇。此外，有报道从金银花叶子中分得8种醇甙或酚甙，主要为多元醇甙、异木酚素甙、香豆素甙等。

发明内容

本发明旨在提供一种金银花组织培养及其培养基制备，以金银花器官、组织和细胞进行组织培养和改良，实现金银花量产。

为实现上述目的，本发明所述一种金银花组织培养及其培养基制备，其特征在于：取金银花的种胚经消毒后在该培养基上培养，在25±1℃，光照2000Lux下培养60天，产生出丛生芽，转移到培养基相似的试管里，仍在上述条件下培养，10～15天就可诱导生根。

本发明所述一种金银花组织培养及其培养基制备，其特征在于：实现步骤如下：

一、外植体的选取与处理：首先选取金银花叶片，叶片先用0.1～0.3％的洗涤精溶液小心洗净后，自来水冲洗25～30分钟后，接着在无菌条件下，用75～80％酒精处理30秒，再用0.1％升汞消毒灭菌8～10分钟，用无菌去离子水漂洗4次，每次漂洗5分钟，之后，在超净工作台上用灭菌的医用手术刀将叶片切成1.5～2.0cm的具叶脉的叶片外植体；

二、将切好的叶片外植体，接入下列培养基中培养，培养室温度23～28℃，光照强度为2000～2500Lux，每天14h光照；

三、将具根及几个完整叶芽打开瓶口，于散射光下练苗两天后，移栽至盛大田中，并用塑料薄膜封口，温度控制在24℃，相对湿度为80～85％及散射光下保温保湿3天后，去掉薄膜，移至遮荫大棚中生长，成活率达99％以上，且栽培30天后就可从移栽的小苗上长出健康的。

所述培养基为：KNO₃ 1200mg/L、NH₄NO₃ 1800mg/L、KH₂PO₄ 200mg/L、CuCl₂ 400mg/L、H₂BO₃ 1mg/L、MnSO₄H₂O 0.5mg/L、ZnSO₄7H₂O 1.0mg/L、CuSO₄5H₂O 0.1mg/L、铁盐5.0mg/L、甘氨酸10.0mg/L、烟酸2.0mg/L、琼脂6000mg/L、红糖30000mg/L、赤霉素1～5mg/L、激动素1～3mg/L、盐酸吡哆素5.0mg/L、盐酸硫胺1.0mg/L、酪蛋白酶4.0mg/L；调节pH值为5.8～6.0。

本发明所述一种金银花组织培养及其培养基制备，其有益效果在于：不受季节和气候的影响，因而，非常适合于全年批量大规模生产金银花的种苗；本方法从外植体上经愈伤组织阶段产生金银花的试管苗，因而既省工又易于操作，还可有效地避免由愈伤组织产生的变异的不足。

具体实施方式

以下实例为本发明作进一步阐述。

实施例1

一、外植体的选取与处理：首先选取金银花叶片，叶片先用0.1％的洗涤精溶液小心洗净后，自来水冲洗25分钟后，接着在无菌条件下，用75％酒精处理30秒，再用0.1％升汞消毒灭菌8分钟，用无菌去离子水漂洗4次，每次漂洗5分钟，之后，在超净工作台上用灭菌的医用手术刀将叶片切成1.5～2.0cm的具叶脉的叶片外植体；