[发明专利]一种催化二酰甘油酰基化的酶

说明书

技术领域

本发明属于酶蛋白技术领域，具体涉及一种催化二酰甘油酰基化的酶。

背景技术

随着全球能源消耗量的不断上升，能源短缺的危机越发棘手。而生物柴油由于其良好的环保性、润滑性及安全性，作为一种新的可再生能源逐渐受到关注。但目前阻碍生物柴油商业化的主要原因是生产成本高，传统的生物柴油制备工艺复杂且产物纯度低，不利于大规模生产；因此通过基因工程技术改造产油微藻成为一种必然的趋势。而在产油微藻筛选实验中，假微型海链藻(T.pseudonana)的中性脂含量最高(王金娜等，2010)，而生物柴油的主要原料为中性脂，因此进一步提高假微型海链藻(T.pseudonana)的含脂量，降低生物柴油的生产成本，具有重要意义。

二酰甘油酰基转移酶(diacylgycerol acyltransferase，DGAT)催化二酰甘油(DAG)酰基化从而生成三酰甘油(TAG)，是Kenney途径的最后一步关键限速酶(Settlage S B，et al，JAOCS，75，7：775-781)，对微藻的油脂合成具有重要的影响作用。近年来已发现该酶存在的类型为四种：DGAT1、DGAT2、WS/DGAT和胞质内DGAT。其中前两者蛋白主要结合在内质网膜上，是一种微粒体酶，后两者目前研究较少。目前对于假微型海链藻(T.pseudonana)二酰甘油酰基转移酶(DGAT)的研究仍属于空白阶段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种来自于假微型海链藻中负责催化二酰甘油酰基化的酶，并可将所分离的酶用于遗传工程来制备高产油微藻，以弥补现有技术的不足。

本发明提供一种催化二酰甘油酰基化的酶，其特征在于：

a、所述酶的氨基酸序列为SEQ ID NO：1；

b、在a中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有a中所述酶的活性的，由a衍生的酶。

本发明还提供一种核苷酸，用于编码上述的催化二酰甘油酰基化的酶。

所述的核苷酸的序列为SEQ ID NO：2。

本发明还提供一种重组质粒，用于表达本发明筛选出的催化二酰甘油酰基化的酶，该重组质粒携带的基因的序列为SEQ ID NO：2。

上述的酶用于生物柴油的生产。

本发明获得的来自于假微型海链藻中负责二酰甘油酰基化的蛋白经真核表达后得到的重组蛋白相对于其他酰基转移酶，具有明显促进拟南芥合成三酰甘油的作用，可应用于生物柴油的生产。本发明的二酰甘油酰基转移酶可应用于基因工程微藻的改造，能够更好地提高工程藻的产油量，大大减少生物柴油的生产成本。

具体实施方式

下面结合实例对本发明的方法做进一步说明。但实例仅限于说明，并不限于此。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常可按常规条件，如J.萨姆布鲁克(Sambrook)等编写的《分子克隆实验指南》中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件运行。

实施例1：本发明的二酰甘油酰基转移酶基因的全长cDNA获取

本发明首先利用RACE技术扩增二酰甘油酰基转移酶基因的全长cDNA，具体步骤为：

1、3′RACE操作及序列分析：

总RNA的提取和cDNA合成：离心获取假微型海链藻的藻泥并滤干，参照invitrogen公司Trizol抽提试剂说明书进行RNA提取。3′端基因片段的扩增采用Takara公司3′-Full RACE Core Set Ver.2.0试剂盒进行第一链的合成，得到10μlcDNA第一链产物。