[发明专利]一种猪基因表达的MCK-DGAT1载体及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及一种猪基因表达的MCK-DGAT1载体，同时还涉及一种猪基因表达的MCK-DGAT1载体的制备方法。

背景技术

基因的表达(gene expression)是指从DNA到蛋白质的过程，而对这个过程的调节称为基因的表达调控。而基因的表达调控是一个多层次的复杂过程，受不同的调节因素控制。它是通过多阶段水平的调节来实现的，即转录前、转录、转录后、翻译、翻译后五个水平的调控。高等生物的生长发育就是由不同基因在时间和空间上的有序表达和协同作用实现的，而在此过程中基因表达的开启、关闭、表达部位、表达量的高低等都将会受到各阶段水平的精细控制。启动子(promoter)是指一段能使基因进行转录的DNA序列，如果结构基因在组织或发育阶段特异性启动子的启动子的调控下，基因往往只在某些特定的组织器官中表达，并表现出发育调节的特性。

随着基因工程的飞速发展，如何使外源基因按照人们的意愿正确、高效和稳定的在生物体内表达成为研究的热点。利用一些重要的特异性的或特定条件能诱导的启动子构建一系列能够高效表达外源基因的表达载体，同时结合转基因技术将这些外源基因导入生物体内，培育出能够完全按照人们的设计初衷来表达外源基因的动植物新品种或新品系成为现代分子育种的最终落脚点。

Genetically Modified——转基因，简称GM，是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。利用转基因技术可以改变动植物性状，培育新品种。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。

肌肉肌酸激酶(Muscle Creatine Kinase，MCK)，被证实在骨骼肌和心肌组织中高水平的表达(Amacher，S.L，S.L.，J.N.Buskin，and S.D.Hauschka.1993；Dorit B.Donoviel，1996；Margaret A.Shield et al，1996；Jane E.Johnson et al，1989)，一些体外转染骨骼肌肌细胞和成纤维细胞的研究，已鉴定出2个MCK增强子元件和一个近端启动子元件，这些元件只在分化的骨骼肌细胞中表达，一个包含MCK5’端序列3300个核苷酸的整合基因显示出氯霉素乙酰基转移酶的活性水平在骨骼肌中，比其它肌肉组织，如肾、肝和脾高104，在新机种的表达也比其它非肌肉组织高2-3个数量级。

二酰基甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltrabsferase，DGAT)是脂肪细胞中控制TAG合成的核心酶(Cases S，Smith SJ and Zheng YW，1998；Li Liu，Nancy Chen and Xiaojing Shi，2007；Li Liu，1Xiaojing Shi et al.2009；Manco，M.，et al.2000；Scot J，Eric Yen and Chi-Liang，2008；Yen C-HE，Monetti M and Burri B J et al.，2005；Yu，Y.H.，and Ginsberg，H.N，2004；ZhangY，Oelkers P and Sturley SL，2002)，在细胞甘油脂类的代谢中起着重要的中心作用，其主要作用机制是使二酞甘油(diacylglycerol，DAG)加上脂肪酸酰基形成三酰甘油(triacylglycerol，TAG)，由于DGAT在三酞甘油合成和能量储存中存在重要作用，因而DGAT也可能在肠脂肪吸收，脂蛋白集合，血浆中甘油三醋浓度的调节及脂细胞中脂肪的沉积，肌肉中能量的代谢等方面发挥作用，并还能影响产奶量和产蛋量。